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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 转化感受态
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amberhwk

新虫 (小有名气)

[求助] 转化感受态 已有4人参与

感受态做表达用应该用BL21的，但是做的时候转到了DH5中，如果在DH5中挑出来阳性菌，可以再将这个质粒转到BL21中吗

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1楼 2016-05-31 15:21:46
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猛兽

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-29 07:45:02
自然是可以的，新手做克隆的时候一般都是先转到克隆宿主菌，然后再提质粒转到表达宿主菌。
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2楼2016-05-31 16:25:55
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踏云逐月

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-29 07:45:48
可以的，为避免阳性的话可以先做个PCR验证一下，这样再提质粒转化BL21会比较保险一些吧！
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amberhwk
3楼2016-05-31 16:29:54
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221345

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-29 07:46:06
当然可以，但是这样会出现假阳性，可以先做菌落PCRJ验证，这样再转表达菌会更保险
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4楼2016-05-31 22:31:55
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miega

银虫 (小有名气)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-06-29 07:45:28
大肠杆菌dh5是扩增外源基因的，可以大量扩增质粒，所以你可以先把转化后的dh5挑几个做菌液pcr，阳性的再提取质粒做双酶切鉴定，再把双酶切鉴定呈阳性的质粒导入bl21诱导表达

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amberhwk
5楼2016-06-01 00:43:03
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普通回帖

vjebejw570
祝福
6楼2016-06-01 11:27:58
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amberhwk

新虫 (小有名气)
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引用回帖:
3楼: Originally posted by 踏云逐月 at 2016-05-31 16:29:54
可以的，为避免阳性的话可以先做个PCR验证一下，这样再提质粒转化BL21会比较保险一些吧！

好的，明白了

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7楼2016-06-01 19:35:32
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amberhwk

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by miega at 2016-06-01 00:43:03
大肠杆菌dh5是扩增外源基因的，可以大量扩增质粒，所以你可以先把转化后的dh5挑几个做菌液pcr，阳性的再提取质粒做双酶切鉴定，再把双酶切鉴定呈阳性的质粒导入bl21诱导表达
...

这样是不是更容易转化

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8楼2016-06-01 19:35:55
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匿名

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9楼2016-06-01 20:14:48
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bzzwx70
祝福
10楼2016-06-01 20:53:40
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