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cloudwindy

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教一个问题,关于HPLC

各位大虾:
   本人最近在做一个产品的HPLC分析时出现了一个非常奇怪的问题。我采用进样量为5微升时,出峰时间5.1~5.2,出来一个很好的单峰。当加大进样量到10微升,奇怪的事情出来了,在4.9开始出峰,一直出峰到5.2分钟,并且出现双峰(肩峰)。继续加大进样量,居然从4.7分钟开始出峰,出现三个峰,而且这种现象可以重复。我采用的流动相:甲醇:水=70:30。这应该对我的产品不会有分解作用。请教各位你们遇到过这种情况么?大家帮忙分析一下。
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leonard187

木虫 (著名写手)


佳怡(金币+1,VIP+0):感谢应助~
会不会因为进样量大导致的?保留时间(按峰的最高点计)是不是一致?如果是那似乎应该是量导致的风变宽,比较类似制备HPLC的超载。不过10微升应该不会差那么多吧。听听大家意见。
燃烧的冰
2楼2008-11-03 15:05:58
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finely

铁杆木虫 (正式写手)


佳怡(金币+1,VIP+0):感谢应助~
有可能是超载了出现了你说的肩峰现象。我有一次做的时候,因为样品里的杂质含量很低,所以要加大进样量,这时候主成分的峰就出现了肩峰,因为量太大了。你可以将进样量调小一点,走个全波长,看看峰的纯度,就可以大致看出该峰是不是包含另外的杂质的了
3楼2008-11-03 16:02:30
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jinshanshi88

木虫 (著名写手)


wingcat(金币+1):谢谢应助
可能是因为柱子固定相脱落,出现不同的出峰路径造成的
4楼2008-11-03 16:03:35
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jjf4085

木虫 (正式写手)


wingcat(金币+1):谢谢应助
液相一般都是固定的定量环,楼主难道进一针换个定量环啊?还有液相的进样量怎么只有几微升呀?如果是20微升的定量环,进样量太少,我想结果肯定是不一样的,楼主再仔细检查一下...
5楼2008-11-03 20:10:53
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dyq214

金虫 (正式写手)


wingcat(金币+1):谢谢应助
楼上,自动进样是1ul都可以的,至于楼主的问题,是不是你的样品体系复杂造成的,量一大,表现出来就明显了,也不太对,很难解释,除了超载这个比较有说服力!
6楼2008-11-03 20:26:04
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zhangsibao

木虫 (正式写手)

回复楼主

★ ★
wingcat(金币+2):谢谢应助
建议楼主可以采用以下步骤:
1、首先采用紫外分光光度计检测一下,你的主峰是否就是一种物质。
2、如果楼主可以确定该主峰是一种物质,那么可以确定是由于楼主进样量过大造成了色谱柱的过载,从而产生峰分叉。
不过,本人怀疑是后面的一种情况。
7楼2008-11-03 20:43:23
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lchn18

金虫 (正式写手)

★ ★
wingcat(金币+2):谢谢应助
楼主说的现象是超载的问题了,超载会导致的现象:
1.出现分叉峰(肩峰);
2.出现峰展宽,就是所谓的保留时间加长;
3.出现谱峰拖尾,越往后越严重;
当然,出现峰展宽、拖尾等现象也有其他的原因,如:柱子的封板堵塞、柱床塌陷……都会出现拖尾、峰展宽。
[img=88,31]http://user.meizu.com/data/avatar/000/66/24/88_avatar_middle.jpg[/img]
8楼2008-11-03 21:03:00
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cloudwindy

铜虫 (小有名气)

感谢大家的回答,我个人觉得不会是柱子本身的问题,因为这些结果可以不断重复。我想如果柱子本身的问题在每个进样量都会出现分叉吧。

我们液相的检测限很高,平时峰高有1000mv左右的,这次20微升才到200mv左右,并且肩峰是左边矮右边高。

不知该怎么解释。
9楼2008-11-04 16:10:22
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ld63462693

银虫 (正式写手)


佳怡(金币+1,VIP+0):感谢应助~
建议楼主在这种情况下可以先对你的样品进行点板。看看是不是纯物质。。要是纯的 话。。可能就是超载引起的。。。
    对于大家的意见你再看看。也许发现就在细节上。。。
呵呵。。呵呵。。 @@平常心--平常心@@
10楼2008-11-04 16:39:20
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