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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于脂肪酶活性测试的问题
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_ao_bo

新虫 (小有名气)

[交流] 关于脂肪酶活性测试的问题

我的课题是固定化酶方面的，现在在测酶活性，用的测试方法是对硝基苯酚法，做实验的时候发现底物不好溶解，我的底物配制：A液——3mg/mL的对硝基苯棕榈酯异丙醇溶液，B液——含有1%（w/V）曲拉通100的磷酸缓冲溶液（pH=7），将A液和B液按照1：9进行混合，溶液立刻变浑浊，一直没变澄清，这样直接用于酶活测试肯定会影响紫外的吸光度。。。我上网查看到挺多人也有这个问题，有的人说超声就可以，但是我超声十分钟也没有任何变化。。然后看到有的文献是进行酶催化之后用离心分离的方法除掉沉淀再进行紫外测试，这个感觉有点繁琐，，，有没有大神知道更好的解决办法呢？急求。。。
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1楼 2016-05-30 11:08:17
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novodisk

铜虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by 琉璃月028 at 2016-08-08 11:33:38
我也做脂肪酶，但我是化学出身，刚涉猎生物方面的东西，我检测脂肪酶的活性一直是用水解三丁酸甘油酯，然后用氢氧化钠滴定，不知道你的东西是不是可以用这个方法测，但是我测出来的活性和买的酶的活性指标差好多，所 ...

脂肪酶的活性和活性定义以及使用的底物都有很大关系，就拿你使用的酸碱滴定法，你使用的底物是三丁酸甘油酯，国标方法使用的是橄榄油，原理都一样，但是因为底物不同，所得结果就差很大，橄榄油要低很多，三丁酸甘油酯的结果是橄榄油的2倍以上。
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10楼2018-04-24 13:29:21
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fyz72
2楼2016-05-30 11:10:01
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_ao_bo

新虫 (小有名气)
或者会不会是曲拉通的问题，因为我以前用的另一牌子的triton X-100就没有这么严重的沉淀。
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3楼2016-05-30 11:11:32
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_ao_bo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fyz72 at 2016-05-30 11:10:01

如果觉得我做的实验过程有什么问题明说
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4楼2016-05-30 11:13:41
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_ao_bo

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fyz72 at 2016-05-30 11:10:01

有什么问题请明说 谢谢
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5楼2016-05-30 11:14:48
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琉璃月028

木虫 (正式写手)
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我也做脂肪酶，但我是化学出身，刚涉猎生物方面的东西，我检测脂肪酶的活性一直是用水解三丁酸甘油酯，然后用氢氧化钠滴定，不知道你的东西是不是可以用这个方法测，但是我测出来的活性和买的酶的活性指标差好多，所以也不确定此方法准不准。
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6楼2016-08-08 11:33:38
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肖你0522

新虫 (初入文坛)
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你问题解决了吗？

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7楼2016-12-05 18:56:07
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wzx323

铁虫 (正式写手)
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我就是用对硝基苯酚法，标准曲线做的没有问题。样品会有泡沫，浑浊没有你说的这么严重。

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Z&D
奔跑吧蜗牛
8楼2016-12-05 19:31:34
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Z&D

铁虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by wzx323 at 2016-12-05 19:31:34
我就是用对硝基苯酚法，标准曲线做的没有问题。样品会有泡沫，浑浊没有你说的这么严重。

我想请问你一下你做对硝基苯酚的标曲是怎么做的尼？有没有具体的实验步骤和浓度测定可以参考一下尼？谢谢

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未来的我一定会感谢现在拼命的自己！
9楼2017-11-20 20:52:19
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