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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR后直接跑电泳，为什么会出现这样的现象？
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飞雪踏春

银虫 (小有名气)
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18楼: Originally posted by 木头兜儿 at 2016-05-30 19:25:32
可是我一般都用0.25g的琼脂糖，25ml的缓冲液的啊，平时都能跑出来的啊...

模板脏了会对PCR酶的活性有影响，以至于PCR过程没有真正进行扩增。另外，制备模板过程中如果有用酚仿抽提的步骤，酚仿如果有残留的话PCR酶会完全失活。

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21楼2016-05-30 23:27:26
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木头兜儿

新虫 (初入文坛)
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21楼: Originally posted by 飞雪踏春 at 2016-05-30 23:27:26
模板脏了会对PCR酶的活性有影响，以至于PCR过程没有真正进行扩增。另外，制备模板过程中如果有用酚仿抽提的步骤，酚仿如果有残留的话PCR酶会完全失活。
...

没有用酚仿抽提啊
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22楼2016-05-31 13:43:34
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木头兜儿

新虫 (初入文坛)
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17楼: Originally posted by 星火之源 at 2016-05-30 19:24:51
没扩增出来，可能是程序的问题或者扩增体系不对

我原来也是用这个程序跑的，也是这个扩增体系，那个应该没问题吧
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23楼2016-05-31 13:47:11
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我爱chi辣椒

木虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
有可能是模板浓度过高，稀释一下试试，PCR也不是模板越多越好。

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A right way maybe not a good way！
24楼2016-06-01 00:02:20
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雨儿天0320

铜虫 (正式写手)
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6楼: Originally posted by tfytli at 2016-05-29 23:08:48
没有条带，还有杂质有点多

同意，之前做实验也会出现这种情况，就是基因组DNA太多，没有PCR成功
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25楼2016-06-01 14:09:31
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nomandies

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以减少上样量试试

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26楼2016-06-01 16:01:53
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木头兜儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
26楼: Originally posted by nomandies at 2016-06-01 16:01:53
可以减少上样量试试

上样量：染料=5:1 μl 上样量还多吗
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27楼2016-06-03 22:48:50
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木头兜儿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
25楼: Originally posted by 雨儿天0320 at 2016-06-01 14:09:31
同意，之前做实验也会出现这种情况，就是基因组DNA太多，没有PCR成功...

你的意思是模板DNA太多，不纯是不是啊
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28楼2016-06-03 22:52:08
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胡建琴

新虫 (初入文坛)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该点样的时候把孔弄破了吧！
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29楼2016-06-04 08:58:10
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Cathering_w

新虫 (正式写手)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
看你模板用的是什么了，自己提的？一个可能是降解，还有就是加太多了，再就是你梳子是不是有干胶啊

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博士终于毕业了，未来还有什么困难能难得倒我呢！加油我得未来。
30楼2016-06-04 13:03:40
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