DTT还原抗体二硫键的问题 - 新药研发 - 质量控制 - 第2页小木虫论坛-学术科研互动平台

yangdw123457

★
hshever(金币+1): 谢谢参与

12楼2016-05-27 07:07:23

yangdw123459

★
hshever(金币+1): 谢谢参与

13楼2016-05-27 07:09:57

yangdw123458

14楼2016-05-27 07:14:19

fyz72

15楼2016-05-27 13:20:57

areszx

铁杆木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 10427.5
帖子: 816
在线: 110小时
虫号: 555240
注册: 2008-05-08
专业: 生物大分子结构与功能

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:43

针对IgG1抗体先铰链区再轻重链，其他类型的不清楚。但是这两种二硫键的反应都很迅速，没有明显差别。

16楼2016-05-28 07:25:34

sexymengmeng

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 371.5
帖子: 142
在线: 41.3小时
虫号: 2223826
注册: 2013-01-05
专业: 生物大分子结构与功能

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:41

最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中，很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下，这两种二硫键都会被完全打开的，很难做到只打开其中一种。而轻链内部和重链内部二硫键，一般可以做到不完全打开。这个你可以查阅分析化学杂志，有文章做过单抗二硫键的这个研究的。

17楼2016-05-29 09:23:33

hshever

金虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 25
散金: 807
红花: 2
帖子: 363
在线: 389.6小时
虫号: 922406
注册: 2009-12-07
性别: GG
专业: 免疫反应相关因子与疾病

hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:49

引用回帖:

17楼: Originally posted by sexymengmeng at 2016-05-29 09:23:33
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中，很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下，这两种二硫键都会被完全打开的，很难做到只打开其中一种。而轻链内部 ...

你是质谱分析的啊，果然专业。我现在的试验是只用DTT，不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开，好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开，我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部的或者那个更敏感，非常感谢你的专业回答

呵呵

18楼2016-05-29 09:58:58

sexymengmeng

铜虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 371.5
帖子: 142
在线: 41.3小时
虫号: 2223826
注册: 2013-01-05
专业: 生物大分子结构与功能

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

18楼: Originally posted by hshever at 2016-05-29 09:58:58
你是质谱分析的啊，果然专业。我现在的试验是只用DTT，不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开，好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开，我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部 ...

你是要质谱分析，还是要干嘛呢？你用了SDS或者尿素，后面就不太好上质谱了。SDS和尿素是为了打开蛋白结构，使其变性，的确可以帮助DTT更有效的打开二硫键。只用DTT的话，抗体内部二硫键不容易完全打开。轻重链和铰链区都不算抗体内部二硫键，不变形也很容易打开的。

19楼2016-05-29 20:31:33

liyy2011521

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 25
红花: 1
帖子: 38
在线: 16.3小时
虫号: 1302505
注册: 2011-05-21
性别: MM
专业: 化学生物学与生物有机化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

引用回帖:

能告诉一下这个文章的标题吗?不太好查到

20楼2020-02-26 16:27:33