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hshever

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[交流] DTT还原抗体二硫键的问题

最近做实验，用DTT还原抗体，没有加其他的变性剂，比如SDS,盐酸胍，尿素等，那么问题来了，DTT首先还原的是抗体那个位置的二硫键啊，是铰链区的还是抗体重链和轻链之间的，相关资料上哪里查啊。

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呵呵

1楼2016-05-27 00:13:47

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areszx

铁杆木虫 (正式写手)

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hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:43

针对IgG1抗体先铰链区再轻重链，其他类型的不清楚。但是这两种二硫键的反应都很迅速，没有明显差别。

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16楼2016-05-28 07:25:34

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sexymengmeng

铜虫 (小有名气)

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hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:41

最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中，很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下，这两种二硫键都会被完全打开的，很难做到只打开其中一种。而轻链内部和重链内部二硫键，一般可以做到不完全打开。这个你可以查阅分析化学杂志，有文章做过单抗二硫键的这个研究的。

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17楼2016-05-29 09:23:33

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hshever

金虫 (正式写手)

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hshever: 回帖置顶 2016-05-29 10:05:49

引用回帖:

17楼: Originally posted by sexymengmeng at 2016-05-29 09:23:33
最敏感的是轻重链间的二硫键。你可以看到两重链一轻链叫HHL的抗体片段化在生产过程中，很容易形成。随后是铰链区的两对二硫键。不过在DTT条件下，这两种二硫键都会被完全打开的，很难做到只打开其中一种。而轻链内部 ...

你是质谱分析的啊，果然专业。我现在的试验是只用DTT，不用SDS或者尿素之类的把抗体给先打开，好像只用DTT的话包裹在抗体内部的二硫键不容易被打开，我不太清楚轻重链间的二硫键和铰链区域的二硫键那个是包裹在内部的或者那个更敏感，非常感谢你的专业回答

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呵呵

18楼2016-05-29 09:58:58

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