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wanghaitao2193

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 求助:新手,免疫双向扩散的问题

我做抗体效价的时候一直没有沉淀线出现,用的是人的IgG和羊抗人。
请教大侠们,这种试验操作的关键是什么?
我配制的PBS在室温下保存的,之前经过消毒了,按照配方配后pH本应为7.2,但是差距较大,我就用盐酸和氢氧化钠进行了pH调解,之后高压消毒。琼脂,用0.8-0.9%的生理盐水
抗原的浓度:1mg/ml
抗体由于是液体,我也不知道是否纯,应该也是配1mg/ml吧,我就取了5微升配成1ml 的PBS溶液了,之后放在湿盒中,37度水浴恒温和38度烘箱恒温都试过,仍然没有出现,
我点样的时候,取5微升,或者十微升,都不行,因为液体多了,我发现会有溢出孔德现象,
请大侠们指点迷津
哪一步关键,我做的什么地方有严重问题,导致出不了沉淀线,求答案谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-11-8 at 15:26 ]
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catzp

银虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
wanghaitao2193(金币+5,VIP+0):thanks it's of some help
多做几个梯度,比如1:128、256、512、1024,还有就是你确定你的抗原和抗体都没有问题吗?有时候抗原没有抗性,或者抗体效价过低,都不会出现条带。
如果条带过浅,你可以染色看看有没有条带
拙见,仅供参考
2楼2008-11-08 15:15:03
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