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肿瘤多细胞球培养
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请教各位前辈，我最近在做MCF-7多细胞球的培养。用1.5%的琼脂糖（无血清培养基溶解后，高压灭菌）铺96孔板。接种密度是1000-4000个每孔，每孔琼脂糖体积50-100微升都试验过。但是，总是形成不了细胞球。偶尔形成过细胞球，形状也极其不规则，细胞间连接很松散。做了好几个月了，总是失败。养的最好的情况就是图片那种，但是也不能用啊。 请教各位前辈，能不能说下自己的经验，或者培养时的关键操作呢？例如：琼脂糖密度，铺板体积，细胞接种数量，换液频率，以及一些关键的操作手法。 我主要是，趁热将琼脂糖加入96孔板后，放凉，然后接种细胞。接种后，采用十字法，摇匀（十下左右吧）。然后就放入培养箱培养，3天后半量换液。接着就是隔天一次半量换液。跟文献的方法一样，就是形成不了细胞球。即使形成了也是很不规则的，不能用来做实验，发文章。 还望前辈赐教。  J~%JGTZ$52766_$0()8J212.png |
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