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darlingbear

新虫 (小有名气)

[求助] 小分子蛋白(约14kD),需要在跑胶和转膜上注意些什么 已有1人参与

跑这种小分子蛋白对running buffer或trans buffer有没有什么特殊的要求

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吖桶

新虫 (初入文坛)

温度也很重要,冰浴有好的效果

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5楼2016-05-24 17:27:51
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普通回帖

Mr童先森

新虫 (正式写手)

进步
2楼2016-05-24 12:51:20
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darlingbear

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Mr童先森 at 2016-05-24 12:51:20
不小阿 普通就可以

总是做不出来,不知道是哪里有问题呀,唉

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3楼2016-05-24 13:11:24
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Mr童先森

新虫 (正式写手)

进步
4楼2016-05-24 17:17:32
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

电泳能做出来吧?染色后能看到目的条带吗?做WB要注意上样量,上样蛋白最好控制在20——40ug之间,转膜一般用湿转,14KD的蛋白用0.22um的膜、180mA,30分钟即可。全程注意控温,冰水浴转膜。   封闭1——2h,一抗孵育最为关键!一抗的好坏直接影响最终结果。一般4℃孵育过夜,第二天多次清洗,二抗推荐用1:10000倍稀释(影响背景值)。      WB最重要的就是一抗,其他步骤注意一下都挺好规范的。

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» 本帖已获得的红花(最新10朵)

6楼2016-05-29 01:13:53
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darlingbear

新虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-05-29 01:13:53
电泳能做出来吧?染色后能看到目的条带吗?做WB要注意上样量,上样蛋白最好控制在20——40ug之间,转膜一般用湿转,14KD的蛋白用0.22um的膜、180mA,30分钟即可。全程注意控温,冰水浴转膜。   封闭1——2h,一抗孵 ...

我现在问题已经解决了,我的running buffer出了问题,不过还是感谢您的这些建议

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7楼2016-05-30 09:59:49
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沉默、颜泪

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by darlingbear at 2016-05-30 09:59:49
我现在问题已经解决了,我的running buffer出了问题,不过还是感谢您的这些建议
...

running buffer?电泳的问题?祝好。

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8楼2016-05-30 10:14:07
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darlingbear

新虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 沉默、颜泪 at 2016-05-30 10:14:07
running buffer?电泳的问题?祝好。
...

谢谢

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9楼2016-05-30 14:43:58
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木子3214

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by darlingbear at 2016-05-30 09:59:49
我现在问题已经解决了,我的running buffer出了问题,不过还是感谢您的这些建议
...

你好,我现在也是WB,蛋白分子量15kD左右,总是做不出理想的图,你电泳和转膜的参考值是多少
10楼2016-05-30 15:00:26
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