| 查看: 1475 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
请问感受态怎么制备 已有2人参与
|
||
|
做转化中，感受态已经用的差不多了，想自己制备一些，省的买了，求一成功率较高的方法，或者是CaCl2 法的具体步骤，多谢！ 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
300求调剂
已经有10人回复
-
26年电池方向博士申请
已经有5人回复
-
急需调剂
已经有6人回复
-
RY：中国产出的科学垃圾论文，绝对数量和比例都世界第一
已经有18人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有7人回复
-
291求调剂
已经有8人回复
-
271求调剂
已经有36人回复
-
0854调剂
已经有9人回复
-
322求调剂
已经有15人回复
-
085404 298分求调剂
已经有13人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 请问Cacl2-Mgcl2的配制问题(配制,感受态细胞)
已经有0人回复
- 化学感受态的制备？
已经有2人回复
- 最近做T克隆都是阴性，怎么回事？
已经有14人回复
送红花一朵 9楼2016-05-24 11:47:28
2楼2016-05-23 22:06:32
安静de执着14
新虫 (著名写手)
- 应助: 10 (幼儿园)
- 金币: 2265.7
- 散金: 688
- 红花: 10
- 帖子: 1088
- 在线: 200.4小时
- 虫号: 3633437
- 注册: 2015-01-07
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
3楼2016-05-23 23:47:40
sh727986091
金虫 (小有名气)
- 应助: 4 (幼儿园)
- 金币: 3211.4
- 红花: 1
- 帖子: 192
- 在线: 82.3小时
- 虫号: 2336612
- 注册: 2013-03-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
E.coli感受态细胞的制备（CaCl2法） 一、准备 1．高压灭菌50毫升，15毫升离心管；180℃高温灭菌100毫升血清瓶7个，25毫升血清瓶1个，100毫升、20毫升量筒或容量瓶各1个，150毫升、50毫升烧杯各1个，摇菌用150毫升锥形瓶1个。甘油灭菌。10ml移液管3支。 2．制备灭菌水约1000毫升。 3．制备不含氨苄的LB液体培养基500ml；制备不含氨苄的LB培养基平板1-3块。 4．配置1M NaOH 以调节pH用。 5．制备针式过滤器2个，60ml、20ml 一次性注射器各一个。 6．冷冻离心机换50ml转子。 7．按下表配置TFB1、TFB2溶液。 严格按照表中顺序加溶液，配制工作液，再调pH值，过滤除菌，4℃储存。 TFB1（终体积：100ml） MES（0.5M）: 2ml KCl（1M）: 10ml CaCl2?2H2O（1M）: 1ml MnCl2?4H2O（0.5M）: 10ml TFB2 （终体积：20ml） MOPS（1M）： 0.2ml CaCl2?2H2O（1M）: 1.5 ml KCl（1M）: 10ml 甘油（50%）： 6ml 成分 分子式 分子量 储存浓度 储存液准备 MES C6H13NO4S 195.2 0.5M 9.76g/100ml 氯化钾 KCl 74.55 1M 7.455g/100ml 氯化钙（二水） CaCl2?2H2O 147.02 1M 14.702g/100ml 氯化锰（四水） MnCl2?4H2O 197.91 0.5M 9.8955g/100ml MOPS C7H15NO4S 209.27 1M 20.927g/100ml 甘油 50% 50ml/100ml 注：1、MES为：2-N-Morpholino-ethanesulfonic Acid,即2-（N-吗啡啉）乙磺酸。不易溶，配制时用NaOH调pH至6.2。 2、MOPS为：3-N-Morpholino propanesulfonic Acid,即3-（N-吗啡代）丙磺酸。 3、严格按顺序加溶液，配制TFB1工作液，用1M NaOH 调pH值至5.8，用针式过滤器过滤除菌，4℃储存。 4、严格按顺序加溶液，配制TFB2工作液，用1M NaOH调pH值至6.5，用针式过滤器过滤除菌，4℃储存。 （如果上述pH值在一开始时就偏碱，可以用冰乙酸回调） 二、操作步骤： 全过程冰上4℃操作，4℃离心，无菌操作。 划板。挑取宿主菌，在AMP-的LB琼脂糖培养基平板上划线，37℃培养16h。 1、 从过夜培养的不含氨苄的LB平板上挑单个大菌落，接种到5毫升LB液体培养基中，37℃，200rpm，振荡培养过夜。 2、 按1：100将500ul培养物接种到50毫升不含氨苄、预热的LB液体培养基中，37℃，200rpm，振荡培养至OD600=0.45～0.5（约需2～2.5小时）。 3、 0℃（冰上）预冷15分钟。 4、 4000rpm，5分钟，4℃离心收集菌体。弃上清，用15ml TFB1悬浮菌体（涡旋振荡）。冰上放置15分钟。准备1.5毫升离心管30个，冰上预冷。 5、 4000rpm，5分钟，4℃离心收集菌体。弃上清，用3ml TFB2悬浮菌体（涡旋振荡）。冰上放置15分钟。 6、 按100ul/管，将细菌在冰上分装到预冷的离心管（1.5ml）中，转入-80℃冰箱储存。 注：用质粒验证感受态细胞。 发自小木虫Android客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2016-05-23 23:58:16
