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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 请教一个连接后双酶切验证的问题！！！
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melodyxin

铜虫 (小有名气)

[交流] 请教一个连接后双酶切验证的问题！！！

首先，载体大小是2.5kb左右，目的片段是1.5kb左右。
连接转化以后提质粒，电泳结果是4kb左右，说明已经连接成功。

接下来双酶切验证，预期结果是2.5kb、1.5kb各出现一个亮带。
但是我的结果却是4kb、2.5kb各出现一条带，1.5kb处没有带。

这是怎么回事？？？
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1楼 2008-11-01 09:27:50
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
可能酶切不彻底
2.5的条带是不是比较淡而4kb的仍比较亮呢？
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2楼2008-11-01 16:23:52
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wuyamei2980

★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-6 08:52
跑电泳时你可以用20ul试一下，我以前用10ul跑电泳没电带，后来用的量多一倍就有，分析原因可能是量少的原因，也可能不是，你不反试一下
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3楼2008-11-01 21:10:48
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
哦！
2.5条带和4条带亮度差不多的，我只是奇怪1.5k的为什么没出来，而2.5的却能出来？
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4楼2008-11-02 11:15:14
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melodyxin

铜虫 (小有名气)
5楼2008-11-03 12:41:00
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xxh8372

荣誉版主 (文坛精英)

小木虫微笑研究僧
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-6 08:52
可能是量太少了

我也碰到了类似的问题
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____/\~~~/\,----(..)/\____//|(\|(^\/___\/\||__||__|-"
6楼2008-11-03 12:48:55
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jerome711

银虫 (小有名气)
首先酶切不彻底，改善酶切体系。
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做懂得生活的人
7楼2008-11-03 17:38:19
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jerome711

银虫 (小有名气)
★
司马诸葛(金币+1,VIP+0):谢谢交流 8-6 08:51
再次，好多载体构建好后并不会像T Easy一样能切出漂亮的目的条带，这是很正常的。主要是拷贝数不一样，加大上样量试试。
赞一下(6人) 回复此楼
做懂得生活的人
8楼2008-11-03 17:40:48
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