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Anastasiav

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
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虫号: 3764490
注册: 2015-03-25
专业: 兽医学

[交流] Sephadex G-50纯化问题，求指点已有3人参与

背景：GE公司的Sephadex G-50填料装柱（柱体积约为700ml），上样13ml（c大约为11mg/ml），洗脱流速为450ul/min。
问题：G-50分离性能500-30000d，我需要分离28300d和17000d的两种蛋白，结果是大分子贯穿洗脱全程，小分子在中间洗脱出来，但都不是尖锐的峰，与预测不符合，自己又分析不出，之前做小样洗脱，流速130ul/min，也是同样的状况。
求大神们指点指点

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1楼 2016-05-20 12:26:14

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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

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注册: 2015-10-26
性别: GG
专业: 生物化学

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

所谓凝胶排阻就是排阻和渗透来分开蛋白的。两个蛋白分子量相差10倍以上才推荐凝胶排阻的方法分离。你这个两个蛋白分子量都比30000小，都可以进去微球的孔，所以分离效果差是正常的。如果两个蛋白一个被全排阻也就是不进去孔（大于30000），直接外体积下来，另个进去孔，这样还好些。你这样肯定不行。你可以找找两个蛋白其他特性，比如等电点，疏水强弱，有没有可以特异性结合的基团什么的。换一种纯化思路试试。祝你万事顺利。