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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组构建质粒
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简简单单-婧

新虫 (小有名气)
已领完
重组构建质粒
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目的片段有p出来后割胶回收，载体也是酶切后跑电泳割胶回收！为什么做转化后挑了10多个克隆菌液pcr后都是载体自连！还需要再挑克隆呢还是重新做转化呢？大神，求解

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1楼 2016-05-17 22:00:33
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

瘸腿老马

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
把该做的对照做全
最好用不同切点的酶做克隆
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13楼2016-05-19 05:30:13
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简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by yanglijuan at 2016-05-17 22:01:09
？

连接转化后都是载体自连，这正常吗？

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8楼2016-05-17 22:02:30
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6827089

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
做只有切好载体的连接，作对照，可能载体没切开

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9楼2016-05-17 22:08:00
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简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 6827089 at 2016-05-17 22:08:00
做只有切好载体的连接，作对照，可能载体没切开

喔喔，好的！谢谢！我明天下课试试！

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10楼2016-05-17 22:26:35
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杨子沫

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
载体可以用CIAP去磷，减少自连

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11楼2016-05-17 22:50:06
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瘸腿老马

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 简简单单-婧 at 2016-05-17 22:02:30
连接转化后都是载体自连，这正常吗？
...

正常
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12楼2016-05-19 05:27:08
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简简单单-婧

新虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 瘸腿老马 at 2016-05-19 05:30:13
把该做的对照做全
最好用不同切点的酶做克隆

好的～

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14楼2016-05-19 23:26:04
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junior850621

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我会全部验证。pcr阳性对照做了吗？

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15楼2016-05-20 00:31:13
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werq63

金虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
十个都没有验证出来，还是重做吧，载体酶切时间长一点，注意双酶切粘性末端是不是相同

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16楼2016-05-22 13:35:44
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ShenY J

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
碱性磷酸酶防止载体自连

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17楼2016-05-22 14:35:14
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陌路南风2楼
2016-05-17 22:00   回复  
简简单单-婧(金币+1): 谢谢参与
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ynyn83662993楼
2016-05-17 22:00   回复  
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ha1ha14楼
2016-05-17 22:00   回复  
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戏剧国王5楼
2016-05-17 22:00   回复  
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9520034986楼
2016-05-17 22:00   回复  
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yanglijuan7楼
2016-05-17 22:01   回复  
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