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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 带有质粒的DH5α细胞在30度培养有影响吗
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找不到自己

银虫 (小有名气)

[求助] 带有质粒的DH5α细胞在30度培养有影响吗 已有2人参与

因为条件限制，只能在提取质粒前将带有质粒的DH5α细胞在30度下摇菌，原先37度的时候只要十几个小时就能有很高的质粒提取量，现在摇了30个小时，DNA浓度就是一直较少，是因为这个温度大肠杆菌的生长本来就受限制吗，我不管摇20个小时还是30个小时都还是差不多…………………………
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1楼 2016-05-17 16:58:40
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 21:46:03
没做过相关领域，但听过相关报告
30度肯定是影响E.Coli的代谢进程的。但对质粒的影响没有像A.Tume似的，扔到37度就会丢失这么绝对。

该用什么温度去摇菌就用什么温度去摇 莫将就
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Let God do with it as He wills
2楼2016-05-17 17:25:05
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我干过这事，本来该37度高拷贝的治理，在30度摇活生生摇成了低拷贝。。有过3次这样的经验了。
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5楼2016-05-18 21:09:05
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普通回帖

liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)
没影响，是不是你质粒的拷贝数本来就很低
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花落人亡两不知
3楼2016-05-17 21:38:59
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找不到自己

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-05-17 21:38:59
没影响，是不是你质粒的拷贝数本来就很低

没有啊，之前在37度培养条件下测定的核酸浓度就挺高的，而且条带也比较宽
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4楼2016-05-18 11:37:18
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cencheng

新虫 (小有名气)
前几天才做的，有影响，可能会出现非特异性条带！

发自小木虫Android客户端
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6楼2016-05-18 22:26:09
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不加抗应该影响不大吧，我们经常在摇床紧张时候，放在三十度摇，当然也可能你的质粒特殊

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
7楼2016-05-18 23:27:36
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找不到自己

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-18 23:27:36
不加抗应该影响不大吧，我们经常在摇床紧张时候，放在三十度摇，当然也可能你的质粒特殊

我是加了Amp的，现在是两个不同的质粒都是这样的情况，低拷贝就算了，要是不影响用就好了
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8楼2016-05-20 13:00:59
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找不到自己

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-05-18 21:09:05
我干过这事，本来该37度高拷贝的治理，在30度摇活生生摇成了低拷贝。。有过3次这样的经验了。

就是啊，而且不同的质粒都是这样，而且不管摇的时间多长，菌液看起来也挺浑浊的就是质粒少
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9楼2016-05-20 13:02:35
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找不到自己

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by cencheng at 2016-05-18 22:26:09
前几天才做的，有影响，可能会出现非特异性条带！

跑出来的胶其实比较单一，就是量少
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10楼2016-05-20 13:03:28
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