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找不到自己

银虫 (小有名气)

[求助] 带有质粒的DH5α细胞在30度培养有影响吗 已有2人参与

因为条件限制,只能在提取质粒前将带有质粒的DH5α细胞在30度下摇菌,原先37度的时候只要十几个小时就能有很高的质粒提取量,现在摇了30个小时,DNA浓度就是一直较少,是因为这个温度大肠杆菌的生长本来就受限制吗,我不管摇20个小时还是30个小时都还是差不多…………………………
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-17 21:46:03
没做过相关领域,但听过相关报告
30度肯定是影响E.Coli的代谢进程的。但对质粒的影响没有像A.Tume似的,扔到37度就会丢失这么绝对。

该用什么温度去摇菌就用什么温度去摇 莫将就
Let God do with it as He wills
2楼2016-05-17 17:25:05
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我干过这事,本来该37度高拷贝的治理,在30度摇活生生摇成了低拷贝。。有过3次这样的经验了。
5楼2016-05-18 21:09:05
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普通回帖

liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

没影响,是不是你质粒的拷贝数本来就很低
花落人亡两不知
3楼2016-05-17 21:38:59
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找不到自己

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by liuyuxue at 2016-05-17 21:38:59
没影响,是不是你质粒的拷贝数本来就很低

没有啊,之前在37度培养条件下测定的核酸浓度就挺高的,而且条带也比较宽
4楼2016-05-18 11:37:18
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cencheng

新虫 (小有名气)

前几天才做的,有影响,可能会出现非特异性条带!

发自小木虫Android客户端
6楼2016-05-18 22:26:09
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原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不加抗应该影响不大吧,我们经常在摇床紧张时候,放在三十度摇,当然也可能你的质粒特殊

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
7楼2016-05-18 23:27:36
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找不到自己

银虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-18 23:27:36
不加抗应该影响不大吧,我们经常在摇床紧张时候,放在三十度摇,当然也可能你的质粒特殊

我是加了Amp的,现在是两个不同的质粒都是这样的情况,低拷贝就算了,要是不影响用就好了
8楼2016-05-20 13:00:59
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找不到自己

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-05-18 21:09:05
我干过这事,本来该37度高拷贝的治理,在30度摇活生生摇成了低拷贝。。有过3次这样的经验了。

就是啊,而且不同的质粒都是这样,而且不管摇的时间多长,菌液看起来也挺浑浊的就是质粒少
9楼2016-05-20 13:02:35
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找不到自己

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by cencheng at 2016-05-18 22:26:09
前几天才做的,有影响,可能会出现非特异性条带!

跑出来的胶其实比较单一,就是量少
10楼2016-05-20 13:03:28
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