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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

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专业: 疫苗和佐剂研究/接种/免疫

[求助] 请各位大神指教！293细胞传代之后生长一直不匀，难道是我没摇匀？已有2人参与

最近在学习细胞培养，但是陷入了一个泥潭……

每次293细胞传代之后，第二天就能发现细胞很不匀，有的地方特别密，有的地方没细胞……

这是我的传代过程，希望大家帮忙找找原因：
吸出培养基，PBS冲洗，胰酶消化，拍打成单细胞，加培养基终止，离心弃上清，加少量培养基重悬，然后加到预先加了培养基的培养瓶里。最后——左手拿培养瓶瓶尾，右手拿瓶塞，以左右手连线为轴，晃几下.

1.大家都是怎么晃的呢？我也试过在离心管里先直接用足量培养基重悬细胞，然后上下颠倒混匀，直接加到培养瓶里，但是效果也不好。
2.除了“晃”，别的环节应该不会影响细胞生长的均匀度吧？

另外，我用T25的时候，不匀的情况会比T75更严重。

恳请大家帮忙分析一下，小问题，不要介意大材小用啦！

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