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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

[求助] 请各位大神指教!293细胞传代之后生长一直不匀,难道是我没摇匀?已有2人参与

最近在学习细胞培养,但是陷入了一个泥潭……

每次293细胞传代之后,第二天就能发现细胞很不匀,有的地方特别密,有的地方没细胞……

这是我的传代过程,希望大家帮忙找找原因:
吸出培养基,PBS冲洗,胰酶消化,拍打成单细胞,加培养基终止,离心弃上清,加少量培养基重悬,然后加到预先加了培养基的培养瓶里。最后——左手拿培养瓶瓶尾,右手拿瓶塞,以左右手连线为轴,晃几下.

1.大家都是怎么晃的呢?我也试过在离心管里先直接用足量培养基重悬细胞,然后上下颠倒混匀,直接加到培养瓶里,但是效果也不好。
2.除了“晃”,别的环节应该不会影响细胞生长的均匀度吧?

另外,我用T25的时候,不匀的情况会比T75更严重。

恳请大家帮忙分析一下,小问题,不要介意大材小用啦!
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

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感谢参与,应助指数 +1
打哈欠的人: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢分享 2016-08-07 22:44:19
打哈欠的人: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 回答很详细,谢谢! 2016-10-13 14:43:48
可能原因有
1、细胞没有消化完全,吹打不够分散
2、摇晃,先左右晃几下,再前后晃几下
3、细胞传了太多代,状态不行了,重新复苏细胞
2楼2016-05-18 14:34:44
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2016-05-18 14:34:44
可能原因有
1、细胞没有消化完全,吹打不够分散
2、摇晃,先左右晃几下,再前后晃几下
3、细胞传了太多代,状态不行了,重新复苏细胞

谢谢您!
消化问题应该不大,显微镜下基本都成单细胞了。
代数的话,一般多少代之内比较好呢?期待您的解答~

发自小木虫Android客户端
3楼2016-05-19 08:09:57
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yang0071

木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 打哈欠的人 at 2016-05-19 08:09:57
谢谢您!
消化问题应该不大,显微镜下基本都成单细胞了。
代数的话,一般多少代之内比较好呢?期待您的解答~
...

细胞里面的颗粒物比较多,而且细胞容易聚集成团,就重新复苏
细胞状态好的时候,多冻存一点
4楼2016-05-19 08:28:24
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lucialee0807

铜虫 (初入文坛)

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打哈欠的人(nono2009代发): 金币+20 2016-10-15 07:18:28
你培养箱调水平了吗

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5楼2016-05-20 07:29:24
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by lucialee0807 at 2016-05-20 07:29:24
你培养箱调水平了吗

水平了~我把水平仪放进去看了的。还有别的什么原因吗?谢谢指导!

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6楼2016-05-22 13:50:14
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by yang0071 at 2016-05-19 08:28:24
细胞里面的颗粒物比较多,而且细胞容易聚集成团,就重新复苏
细胞状态好的时候,多冻存一点...

颗粒物倒是不常见。聚团的话,最近培养的细胞消化完老有片状物,这个是属于聚团吗?

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7楼2016-05-22 13:52:29
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wujiong66

铜虫 (正式写手)

像你说的那样摇,乘4,每90度旋转一次,最终回到原来的位置,

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以勤奋为信仰者,定成大器
8楼2016-05-22 15:07:29
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yang0071

木虫 (职业作家)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 打哈欠的人 at 2016-05-22 13:52:29
颗粒物倒是不常见。聚团的话,最近培养的细胞消化完老有片状物,这个是属于聚团吗?
...

片状物大多是因为没有消化完全,细胞强行被吹打下来,细胞损伤了
9楼2016-05-22 20:31:45
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zmxwfd

新虫 (初入文坛)

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打哈欠的人(nono2009代发): 金币+20 2016-10-15 07:18:36
把培养瓶放到培养箱后,前后摇两下,左右摇两下,应该就可以了

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10楼2016-05-23 20:42:12
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