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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 请各位大神指教！293细胞传代之后生长一直不匀，难道是我没摇匀？
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)

[求助] 请各位大神指教！293细胞传代之后生长一直不匀，难道是我没摇匀？ 已有2人参与

最近在学习细胞培养，但是陷入了一个泥潭……

每次293细胞传代之后，第二天就能发现细胞很不匀，有的地方特别密，有的地方没细胞……

这是我的传代过程，希望大家帮忙找找原因：
吸出培养基，PBS冲洗，胰酶消化，拍打成单细胞，加培养基终止，离心弃上清，加少量培养基重悬，然后加到预先加了培养基的培养瓶里。最后——左手拿培养瓶瓶尾，右手拿瓶塞，以左右手连线为轴，晃几下.

1.大家都是怎么晃的呢？我也试过在离心管里先直接用足量培养基重悬细胞，然后上下颠倒混匀，直接加到培养瓶里，但是效果也不好。
2.除了“晃”，别的环节应该不会影响细胞生长的均匀度吧？

另外，我用T25的时候，不匀的情况会比T75更严重。

恳请大家帮忙分析一下，小问题，不要介意大材小用啦！
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1楼 2016-05-17 16:29:19
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yang0071

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
打哈欠的人: 金币+20, ★★★很有帮助, 多谢分享 2016-08-07 22:44:19
打哈欠的人: 金币+30, ★★★★★最佳答案, 回答很详细，谢谢！ 2016-10-13 14:43:48
可能原因有
1、细胞没有消化完全，吹打不够分散
2、摇晃，先左右晃几下，再前后晃几下
3、细胞传了太多代，状态不行了，重新复苏细胞
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2楼2016-05-18 14:34:44
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yang0071 at 2016-05-18 14:34:44
可能原因有
1、细胞没有消化完全，吹打不够分散
2、摇晃，先左右晃几下，再前后晃几下
3、细胞传了太多代，状态不行了，重新复苏细胞

谢谢您!
消化问题应该不大，显微镜下基本都成单细胞了。
代数的话，一般多少代之内比较好呢？期待您的解答~

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3楼2016-05-19 08:09:57
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yang0071

木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 打哈欠的人 at 2016-05-19 08:09:57
谢谢您!
消化问题应该不大，显微镜下基本都成单细胞了。
代数的话，一般多少代之内比较好呢？期待您的解答~
...

细胞里面的颗粒物比较多，而且细胞容易聚集成团，就重新复苏
细胞状态好的时候，多冻存一点
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4楼2016-05-19 08:28:24
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lucialee0807

铜虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
打哈欠的人(nono2009代发): 金币+20 2016-10-15 07:18:28
你培养箱调水平了吗

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5楼2016-05-20 07:29:24
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lucialee0807 at 2016-05-20 07:29:24
你培养箱调水平了吗

水平了~我把水平仪放进去看了的。还有别的什么原因吗？谢谢指导!

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6楼2016-05-22 13:50:14
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打哈欠的人

金虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yang0071 at 2016-05-19 08:28:24
细胞里面的颗粒物比较多，而且细胞容易聚集成团，就重新复苏
细胞状态好的时候，多冻存一点...

颗粒物倒是不常见。聚团的话，最近培养的细胞消化完老有片状物，这个是属于聚团吗？

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7楼2016-05-22 13:52:29
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wujiong66

铜虫 (正式写手)
像你说的那样摇，乘4，每90度旋转一次，最终回到原来的位置，

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以勤奋为信仰者，定成大器
8楼2016-05-22 15:07:29
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yang0071

木虫 (职业作家)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 打哈欠的人 at 2016-05-22 13:52:29
颗粒物倒是不常见。聚团的话，最近培养的细胞消化完老有片状物，这个是属于聚团吗？
...

片状物大多是因为没有消化完全，细胞强行被吹打下来，细胞损伤了
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9楼2016-05-22 20:31:45
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zmxwfd

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
打哈欠的人(nono2009代发): 金币+20 2016-10-15 07:18:36
把培养瓶放到培养箱后，前后摇两下，左右摇两下，应该就可以了

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10楼2016-05-23 20:42:12
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