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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 扩不出目的启动子
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lycpu

金虫 (小有名气)

[交流] 扩不出目的启动子 已有11人参与

模板DNA 1ul, dNTP 2ul，buffer 2ul, Ex-Taq酶0.2ul,??上下游引物都是0.5ul, dd水14ul.
PCR的反应条件是：预变性 94℃ 5min, 变性94℃ 30s, 退火 68℃ 45s, 延伸 72℃ 90s, 延伸72℃ 10min, 35个循环。一个月了都没扩出来，求助各位虫友解答。
Maker是DL5000的！

扩不出目的启动子


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1楼 2016-05-17 13:35:10
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意萧02

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
第一，引物设计可能特异性不好，第二，启动子大小多少？延伸时间够不够？第三，酶应该保真性要好的，无论要做后续克隆还是测序你都不可能扩着玩的吧？祝好运。

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12楼2016-05-21 11:40:55
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陈嘉毅

至尊木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
退火温度改变一下试试，最好做个温度梯度找到合适的退火温度，现在也看不出问题所在。

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哈哈哈哈哈哈！
2楼2016-05-17 13:54:58
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2016-05-17 16:43:00
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lycpu

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sloop112 at 2016-05-17 16:43:00
引物设计问题，祝好运

我也觉得，但引物都是用Oligo和premier设计分析过的呢？

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4楼2016-05-17 18:45:07
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