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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] X33用pPICZαA表达蛋白都是胞内,不能分泌到胞外是什么原因? 已有1人参与

我表达的蛋白,用的X33菌株,pPICZαA载体,然后我的基因序列是没有跨膜区域的,基因本身携带的信号肽也去掉了。照理说应该是胞外分泌表达,但是检测表达上清,上清要不就是没条带,要不就是有目的条带,但是检测到的酶活非常低,和空白相差无几,无法判断到底有没有表达出目的酶,而且拿上清条带做western也做不出来,western用的就是抗His的。
  但是酵母沉淀超声破碎的上清里就有目的条带,而且酶活挺强的,western也能做出来。到底是因为什么原因导致它分泌不出来呢,我的蛋白大小是100kDa和90kDa,100kDa的有五个亚基,90kDa的有四个亚基,是不是因为太大了所以分泌不出来?还是分泌到胞外的时候折叠出错了呢?
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2016-05-16 19:36:43
酵母自身的信号肽还在吗?

酵母自身的信号肽指什么?酵母用的X33是野生型,然后重组质粒当时测序特意多测了一段,α-factor和kex2 signal序列都测出来看了,是正确的,而且和我的片段也是正向连接,读码框也是对的。
3楼2016-05-17 10:19:00
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
酵母自身的信号肽还在吗?

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-05-16 19:36:43
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cymstory

新虫 (初入文坛)

酵母沉淀不超声破碎有条带吗

发自小木虫IOS客户端
4楼2017-03-03 21:58:43
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)

您好,请问您的问题解决了吗

发自小木虫IOS客户端
5楼2017-12-05 15:11:41
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