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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » X33用pPICZαA表达蛋白都是胞内，不能分泌到胞外是什么原因？
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)

[求助] X33用pPICZαA表达蛋白都是胞内，不能分泌到胞外是什么原因？ 已有1人参与

我表达的蛋白，用的X33菌株，pPICZαA载体，然后我的基因序列是没有跨膜区域的，基因本身携带的信号肽也去掉了。照理说应该是胞外分泌表达，但是检测表达上清，上清要不就是没条带，要不就是有目的条带，但是检测到的酶活非常低，和空白相差无几，无法判断到底有没有表达出目的酶，而且拿上清条带做western也做不出来，western用的就是抗His的。
  但是酵母沉淀超声破碎的上清里就有目的条带，而且酶活挺强的，western也能做出来。到底是因为什么原因导致它分泌不出来呢，我的蛋白大小是100kDa和90kDa，100kDa的有五个亚基，90kDa的有四个亚基，是不是因为太大了所以分泌不出来？还是分泌到胞外的时候折叠出错了呢？
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1楼 2016-05-15 23:38:47
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ggyy0911

铁虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 粒粒分明 at 2016-05-16 19:36:43
酵母自身的信号肽还在吗？

酵母自身的信号肽指什么？酵母用的X33是野生型，然后重组质粒当时测序特意多测了一段，α-factor和kex2 signal序列都测出来看了，是正确的，而且和我的片段也是正向连接，读码框也是对的。
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3楼2016-05-17 10:19:00
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粒粒分明

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酵母自身的信号肽还在吗？

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2楼2016-05-16 19:36:43
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cymstory

新虫 (初入文坛)
酵母沉淀不超声破碎有条带吗

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4楼2017-03-03 21:58:43
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贪恋尘世

新虫 (正式写手)
您好，请问您的问题解决了吗

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5楼2017-12-05 15:11:41
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