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ggyy0911铁虫 (正式写手)
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X33用pPICZαA表达蛋白都是胞内，不能分泌到胞外是什么原因？ 已有1人参与
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我表达的蛋白，用的X33菌株，pPICZαA载体，然后我的基因序列是没有跨膜区域的，基因本身携带的信号肽也去掉了。照理说应该是胞外分泌表达，但是检测表达上清，上清要不就是没条带，要不就是有目的条带，但是检测到的酶活非常低，和空白相差无几，无法判断到底有没有表达出目的酶，而且拿上清条带做western也做不出来，western用的就是抗His的。 但是酵母沉淀超声破碎的上清里就有目的条带，而且酶活挺强的，western也能做出来。到底是因为什么原因导致它分泌不出来呢，我的蛋白大小是100kDa和90kDa，100kDa的有五个亚基，90kDa的有四个亚基，是不是因为太大了所以分泌不出来？还是分泌到胞外的时候折叠出错了呢？ |
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