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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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condy

新虫 (小有名气)

[求助] southern blot验证细菌基因敲除,怎样设计探针? 已有3人参与

正打算做southern blot 验证细菌基因敲除菌株,我设计的探针是应该和目的基因杂交吗?这样的话,敲除菌株就什么也杂不到了,出发菌株才可以杂出条带。这样设计探针可靠吗?
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
condy: 金币+10, 有帮助 2016-05-23 17:12:34
你是无痕敲除啊,那你看看你去除的那一段里面是否有合适的酶切位点,做成WT两条带,MT一条带。或者,WT和MT都一条带,但是条带大小不同。就是得保证WT和MT都得有带。
9楼2016-05-19 10:25:44
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liygmail

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
细菌基因敲除,用PCR就可以验证了,何必用分子杂交呢
2楼2016-05-14 03:06:37
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肥猫p

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-05-18 07:54:05
一般来说,会设计成:野生型一条带,敲除株株两条带。我觉得你说的敲除株杂交不出条带的设计不好,因为感觉不能充分证明是你敲除后导致没条带,还是你操作不当导致的未杂出条带。
3楼2016-05-15 11:30:04
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condy

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by liygmail at 2016-05-14 03:06:37
细菌基因敲除,用PCR就可以验证了,何必用分子杂交呢

这几个基因比较关键,所以想严谨一点。。。
5楼2016-05-17 09:33:46
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