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蜗牛蓝蓝

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 23.6
散金: 10
帖子: 8
在线: 2.7小时
虫号: 4628183
注册: 2016-04-26
性别: MM
专业: 抗炎与免疫药物药理

[求助] 多环芳烃降解菌的三亲本杂交

利用三亲本杂交的方法将绿色荧光蛋白转入到目的菌假单胞菌中，供体菌和辅助菌均为大肠杆菌
，做了将尽两个月，一直没筛选出阳性接合子，想请大神帮忙看一下哪里出问题了，在实验操作中有哪些注意事项，跪谢！
具体的实验操作：
1、供体菌、辅助菌在LB培养液（含卡那）中培养过夜
2、受体菌在LB培养液（含氨卞）中培养过夜
3、用新鲜的无抗生素的Lb培养液将三种菌OD值调到1.0，然后按1:1:1的体积比混合，4000转离心5分钟，弃上清液，重新用新鲜LB洗涤三次
4、取100ul混合菌于5ml新鲜无抗生素的培养液中,30度170转培养过夜
5、将共培养的菌液稀释到100000倍，取100ul涂布到含卡那和氨卞的LB平板上培养过夜，挑去单菌落于Lb中进行扩大培养

@天使托发自小木虫IOS客户端

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