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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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红太郎张玉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by cencheng at 2016-05-18 22:15:32
可能模板不好,或者你是不是换染料了?

没有换染料,模板不好是指什么,浓度太低,质量不好?但是同样的模板检测其它种群的基因是没有问题的
11楼2016-05-20 10:59:31
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cencheng

新虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-12 17:47:11
我用不同的染料跑同一个模板,有些有双峰,有些是单峰,你可以跑一下定量温度梯度pcr,可能不同的退火温度对它也有影响!

发自小木虫Android客户端
12楼2016-05-20 18:12:00
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sunxiaoxue

新虫 (初入文坛)

楼主请问你这个问题最后怎么解决的呀?我也遇到了同样的问题
13楼2016-06-12 10:52:20
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引物非特异结合,需要重新设计引物。或者target gene丰度太低。或者模板有问题

发自小木虫IOS客户端
14楼2016-06-12 10:57:16
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sunxiaoxue

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 红太郎张玉 at 2016-05-18 20:04:05
能说具体点吗

你好我也遇到了同样的问题  我想问一下 模板浓度是太高了吗?还是太低的原因啊   标准品的曲线峰非常单一尖锐  但是同样的体系模板有时好有时不好
15楼2016-06-13 14:36:51
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王平阳

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你这种情况就是一对引物扩出了两种产物,这两种产物可能是目的序列出现多态性,如果是DNA样品,在杂交品种中极有可能出现,如果是cDNA样品,也有可能出现,这两种情况我都遇到过,所谓HRM对DNA分型就是用的这个原理;这两种产物也可能是其一是非特异性扩增,大小差异不大,一般的PCR分不开,但是GC含量不一样,溶解曲线很容易就分开了。
无论是哪种情况,将PCR产物测序就知道了,多测几个样,我就干过。

等等,你可能会说你的质粒只有一个峰,那必须的,你质粒上只是克隆了其中一种产物,是单克隆,自然只有一个峰,你没发现你质粒的峰和双峰的第二个峰是一致的吗,那么第一个峰就是多出来的另一种产物。

再等等,你的引物确实有问题,你没发现72℃左右还有一个峰吗?虽然质粒做模板特异性高,还是有峰的存在,所以你的质粒样品也不是单峰,而且环境样品该峰就凸显出来了,建议减少引物量或者重新设计引物。
没有做不到,只有想不到!
16楼2016-06-13 17:57:51
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liufan1993

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
15楼: Originally posted by sunxiaoxue at 2016-06-13 14:36:51
你好我也遇到了同样的问题  我想问一下 模板浓度是太高了吗?还是太低的原因啊   标准品的曲线峰非常单一尖锐  但是同样的体系模板有时好有时不好...

请问这个问题你解决了吗?我最近也遇到相同的问题,标品可以,但是样品有的好有的不好
17楼2016-12-28 22:33:21
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