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红太郎张玉

银虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量PCR,溶解曲线出现双峰 已有4人参与

在做质粒标准曲线时,看溶解曲线的效果挺好的,是单一的峰,如图1所示,但当做环境样品时,溶解曲线取出现双峰,如图2所示,请问这是问什么?是我的引物不好,还是模板的问题?

荧光定量PCR,溶解曲线出现双峰
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荧光定量PCR,溶解曲线出现双峰-1
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红太郎张玉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-13 08:57:24
你拿质粒跟样品比是不是有点儿理想化?质粒结果只能证明能括增出来,无法判断特异性。如果你要做样品的情况,就必需首先从样品中得到正确的结果。
曾经有一师妹脑子犯抽,玉米的基因用原始载体做过,结果后续实验拿 ...

是不是说引物不好
6楼2016-05-18 20:03:27
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cencheng

新虫 (小有名气)

可能模板不好,或者你是不是换染料了?

发自小木虫Android客户端
8楼2016-05-18 22:15:32
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
红太郎张玉: 金币+5, 有帮助 2016-05-18 20:03:49
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-12 17:46:58
标曲中只有一个峰,说明引物没有问题,后来出现双峰,可能是模板有问题。
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
2楼2016-05-12 22:12:23
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jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 红太郎张玉 at 2016-05-18 20:03:27
是不是说引物不好...

不仅仅是好不好的事,包括浓度、反应条件都要摸索下。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
9楼2016-05-19 00:26:51
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cencheng

新虫 (小有名气)


myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香,谢谢你的理解与支持。祝您科研顺利,文章多多。 2016-06-12 17:47:11
我用不同的染料跑同一个模板,有些有双峰,有些是单峰,你可以跑一下定量温度梯度pcr,可能不同的退火温度对它也有影响!

发自小木虫Android客户端
12楼2016-05-20 18:12:00
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普通回帖

紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

3楼2016-05-12 23:03:26
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nealandmoz

新虫 (初入文坛)

4楼2016-05-13 00:37:12
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jackyoung

新虫 (正式写手)

你拿质粒跟样品比是不是有点儿理想化?质粒结果只能证明能括增出来,无法判断特异性。如果你要做样品的情况,就必需首先从样品中得到正确的结果。
曾经有一师妹脑子犯抽,玉米的基因用原始载体做过,结果后续实验拿错了样品,用拟南芥的做了半天,结果各种郁闷。

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
5楼2016-05-13 08:57:24
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红太郎张玉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 紫萸香慢001 at 2016-05-12 23:03:26
模板浓度问题

能说具体点吗
7楼2016-05-18 20:04:05
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红太郎张玉

银虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-19 00:26:51
不仅仅是好不好的事,包括浓度、反应条件都要摸索下。
...

做质粒标准曲线,其中的一个目的不就是摸索条件吗,我的质粒标线还可以,然后才拿样品做的呀
10楼2016-05-20 10:58:21
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