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weiyan7654

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组片段转化JM110后挑单克隆不生长,求大神分析原因 已有1人参与

我做质粒大片段和目的基因连接之后直接转化JM110,涂布抗性平板(质粒是卡那抗性的,JM110本身是硫链丝菌素抗性),平板上单克隆长了很多,但是挑单菌之后过夜不长,两次结果都这样,第二次换了抗生素,还是不行,如果是连接不成功,那平板上也不应该长这么多啊,求大神帮我分析一下
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没有做过JM110,不过楼主可以分析一下是不是平板有问题。若是放的时间太久的话抗生素可能会失效,这时候长出的单克隆都是假阳性。
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
2楼2016-05-12 15:08:28
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weiyan7654

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2016-05-12 15:08:28
没有做过JM110,不过楼主可以分析一下是不是平板有问题。若是放的时间太久的话抗生素可能会失效,这时候长出的单克隆都是假阳性。

谢谢回复。你说的是一个因素,但是我做实验的时候注意了这点,第二次用了新的抗生素,平板也是新的。
3楼2016-05-12 19:18:15
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dd370432136

铁虫 (小有名气)

你说的长指的是多长时间?长得多吗?如果单克隆挑了后变成菌丝,就说明是杂菌

发自小木虫Android客户端
4楼2016-05-12 23:01:53
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weiyan7654

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by dd370432136 at 2016-05-12 23:01:53
你说的长指的是多长时间?长得多吗?如果单克隆挑了后变成菌丝,就说明是杂菌

都是过夜培养15个小时左右吧。平板长了不少,挑单克隆之后培养相同时间就不长了(是根本没长),说明转化不成功,但是为什么平板上会长呢?
液体培养时间过长的确会长菌丝,估计那个时候抗生素也失活了。所以杂菌也生长了。
5楼2016-05-13 09:39:38
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Jim_Soon

银虫 (小有名气)

6楼2024-12-30 05:11:26
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