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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组片段转化JM110后挑单克隆不生长，求大神分析原因
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weiyan7654

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组片段转化JM110后挑单克隆不生长，求大神分析原因 已有1人参与

我做质粒大片段和目的基因连接之后直接转化JM110，涂布抗性平板（质粒是卡那抗性的，JM110本身是硫链丝菌素抗性），平板上单克隆长了很多，但是挑单菌之后过夜不长，两次结果都这样，第二次换了抗生素，还是不行，如果是连接不成功，那平板上也不应该长这么多啊，求大神帮我分析一下
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1楼 2016-05-12 10:10:20
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wangranjun

荣誉版主 (知名作家)

广庭之惘然

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没有做过JM110，不过楼主可以分析一下是不是平板有问题。若是放的时间太久的话抗生素可能会失效，这时候长出的单克隆都是假阳性。
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他日扬翼九万里，历大千世界，定我红尘心！
2楼2016-05-12 15:08:28
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weiyan7654

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2016-05-12 15:08:28
没有做过JM110，不过楼主可以分析一下是不是平板有问题。若是放的时间太久的话抗生素可能会失效，这时候长出的单克隆都是假阳性。

谢谢回复。你说的是一个因素，但是我做实验的时候注意了这点，第二次用了新的抗生素，平板也是新的。
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3楼2016-05-12 19:18:15
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dd370432136

铁虫 (小有名气)
你说的长指的是多长时间？长得多吗？如果单克隆挑了后变成菌丝，就说明是杂菌

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4楼2016-05-12 23:01:53
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weiyan7654

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dd370432136 at 2016-05-12 23:01:53
你说的长指的是多长时间？长得多吗？如果单克隆挑了后变成菌丝，就说明是杂菌

都是过夜培养15个小时左右吧。平板长了不少，挑单克隆之后培养相同时间就不长了（是根本没长），说明转化不成功，但是为什么平板上会长呢？
液体培养时间过长的确会长菌丝，估计那个时候抗生素也失活了。所以杂菌也生长了。
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5楼2016-05-13 09:39:38
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Jim_Soon

银虫 (小有名气)
解决了吗
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6楼2024-12-30 05:11:26
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