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li245824369木虫 (小有名气)
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[求助]
求助帮忙翻译一下摘要，英语不好时硬伤阿！
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| 通过NCBI查找到与桦褐孔菌同属的嗜蓝孢孔菌和相近种属菌株的酸性蛋白酶（IO-AP）的氨基酸序列，设计简并引物采用普通PCR方法扩增得到酸性蛋白酶片段，并根据此片段设计两对特异性引物利用cDNA末端快速扩增（Rapid Amplification of cDNA Ends，RACE）技术扩增获得酸性蛋白酶基因的两端序列，将中间片段和两端序列进行拼接获得酸性蛋白酶基因的cDNA全长序列。（GenBank登录号：）对酸性蛋白酶基因序列进行生物信息学分析发现，该基因cDNA序列全长（ORF）为990bp，编码330个氨基酸，推测的蛋白分子量为34.6kD，理论等电点为4.047。其编码的氨基酸序列与地中海嗜蓝孢孔菌的酸性蛋白酶相似性为85%，与其他担子菌酸性蛋白酶的同源性也很高。构建原核表达载体pGEX-4T1-IO-AP，转化大肠杆菌BL21并诱导表达。经过190rpm 、37°摇床IPTG终浓度为0.1mmol/L诱导4h后，收集菌液超声波破碎，分别将上清和沉淀进行SDS-PAGE检测，所构建的原核表达载体表达的融合蛋白与预期蛋白相符，且酸性蛋白酶基因蛋白在大肠杆菌中主要以包涵体的形式表达。然后将表达的重组蛋白进行Western blot分析，结果表明酸性蛋白酶蛋白具有相当好的反应原性。 |
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