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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » Native-page-胶图有疑问，请教大家帮忙解决一下
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ganlanzhih

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 小兔血战到底 at 2016-05-12 11:30:32
我做的是DNA链接了streptavidin，将DNA利用同位素标记，然后跑native page。所以并不需要考马斯亮蓝染色。我用的是1*的TBE作为running buffer。电压一般控制在200V一下，时间的话要根据不同的蛋白质大小了，我一般 ...

这样啊  谢谢你啦  非常感谢
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11楼2016-05-12 20:56:36
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小兔血战到底

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-12 20:56:36
这样啊  谢谢你啦  非常感谢...

不用谢，相互交流共同进步
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Gototheendoftheworldforyou
12楼2016-05-14 12:00:40
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fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
引用回帖:
9楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-11 13:52:01
您好  非常感谢您的回复   我做的是植物蛋白的分离纯化  因为不知道分子量  所以想用这种方式来初步确定一下蛋白的分子量  您说的blue native 有具体的实验方案吗？ 可否分享一下或者给一些其他方面的建议？谢谢...

blue native实验步骤： http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.62.html
蛋白如果要进到胶里需要带负电荷的，native page的电荷取决于等电点，大部分蛋白带电荷很少，所以都进不去胶
所以需要用蓝色染料给蛋白带点负电荷
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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
13楼2016-05-15 04:20:07
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麦子果树

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-12 09:52:01
您好  非常感谢您的回复   我做的是植物蛋白的分离纯化  因为不知道分子量  所以想用这种方式来初步确定一下蛋白的分子量  您说的blue native 有具体的实验方案吗？ 可否分享一下或者给一些其他方面的建议？谢谢...

我想问一下，为什么用这种方法测定蛋白质的分子量呢？ 为什么不用变形电泳呢？  非变性电泳迁移速率不仅受蛋白分子量大小影响，还受电荷量影响呢？
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14楼2016-05-15 17:23:20
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2015yu

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by fuyuandj86 at 2016-05-12 02:57:43
如果不是做EMSA，这样的native page一般来说都不好做，因为蛋白带负电荷很少
最好用blue native

如何加的考马斯亮蓝，直接称取加入酶液中？

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15楼2017-03-05 23:07:09
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鱼儿好开心

新虫 (小有名气)
你好，看你的胶图和我的好像，条带两边都有很深的竖线，这是怎么回事啊？我跑了好多次都是这样，你的胶现在还有这种问题吗？太感谢了，如果能看到你的回复

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16楼2017-04-10 23:04:18
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鱼儿好开心

新虫 (小有名气)
Native-page-胶图有疑问，请教大家帮忙解决一下

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17楼2017-04-10 23:05:29
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fuyue6521

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
18楼2017-05-13 00:01:05
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