Native-page-胶图有疑问，请教大家帮忙解决一下 - 生物科学 - 蛋白电泳/WB

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ganlanzhih

新虫 (初入文坛)

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10楼: Originally posted by 小兔血战到底 at 2016-05-12 11:30:32
我做的是DNA链接了streptavidin，将DNA利用同位素标记，然后跑native page。所以并不需要考马斯亮蓝染色。我用的是1*的TBE作为running buffer。电压一般控制在200V一下，时间的话要根据不同的蛋白质大小了，我一般 ...

这样啊谢谢你啦非常感谢

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11楼2016-05-12 20:56:36

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小兔血战到底

铜虫 (初入文坛)

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11楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-12 20:56:36
这样啊谢谢你啦非常感谢...

不用谢，相互交流共同进步

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Gototheendoftheworldforyou

12楼2016-05-14 12:00:40

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fuyuandj86

版主 (著名写手)

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9楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-11 13:52:01
您好非常感谢您的回复我做的是植物蛋白的分离纯化因为不知道分子量所以想用这种方式来初步确定一下蛋白的分子量您说的blue native 有具体的实验方案吗？可否分享一下或者给一些其他方面的建议？谢谢...

blue native实验步骤： http://www.nature.com/nprot/journal/v1/n1/full/nprot.2006.62.html
蛋白如果要进到胶里需要带负电荷的，native page的电荷取决于等电点，大部分蛋白带电荷很少，所以都进不去胶
所以需要用蓝色染料给蛋白带点负电荷

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The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.

13楼2016-05-15 04:20:07

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麦子果树

新虫 (小有名气)

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9楼: Originally posted by ganlanzhih at 2016-05-12 09:52:01
您好非常感谢您的回复我做的是植物蛋白的分离纯化因为不知道分子量所以想用这种方式来初步确定一下蛋白的分子量您说的blue native 有具体的实验方案吗？可否分享一下或者给一些其他方面的建议？谢谢...

我想问一下，为什么用这种方法测定蛋白质的分子量呢？为什么不用变形电泳呢？非变性电泳迁移速率不仅受蛋白分子量大小影响，还受电荷量影响呢？

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14楼2016-05-15 17:23:20

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