应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 瞬转真核细胞表达蛋白后分子量大了一倍，是什么原因？
91/1返回列表
查看: 1613  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

lrxczy

铁虫 (初入文坛)

[求助] 瞬转真核细胞表达蛋白后分子量大了一倍，是什么原因？

我构建了两个重组质粒pEGFP-C1-F和pEGFP-C1-H，plojet瞬转hela细胞，在不同时间点用GFP抗体检测蛋白表达，发现表达后的F和H蛋白比在大肠杆菌和网上预测的蛋白分子质量大了一倍，我已经考虑GFP标签的大小了，还是打了一倍，比如F蛋白带上GFP标签应该是50KD左右，现在变成了90多KD，是什么原因呢？对于后续检测蛋白的功能有没有影响呢？非常感谢！！！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2016-05-09 17:00:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
真核表达的是二聚体吧，还原电泳看看。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-09 17:20:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrxczy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 小周 at 2016-05-09 17:20:45
真核表达的是二聚体吧，还原电泳看看。

非常感谢！我不太懂这个二聚体是怎么回事，如果是二聚体的原因，跑还原性电泳，再转膜做western就能是原来预测的大小吗？
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-09 17:47:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
可以！你可以做一个还原的，一个非还原的对着看。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-05-09 19:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrxczy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小周 at 2016-05-09 19:38:39
可以！你可以做一个还原的，一个非还原的对着看。

我现在做的就是变性的电泳，但是变性电泳应该是把蛋白的结构都打开了啊，如果有二聚体也应该是打开的呀，还原性电泳不变性，更应该是二聚体折叠的结构吧……

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-09 20:05:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
还原的意思是打开二硫键

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-05-09 20:20:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrxczy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 小周 at 2016-05-09 20:20:57
还原的意思是打开二硫键

我现在做的SDSPAGE就是处理样品时加巯基乙醇的，不是打开二硫键了吗

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-09 22:36:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小周

铁杆木虫 (著名写手)
你查查你的蛋白是不是糖蛋白，糖基化程度多高？原核里没有翻译后修饰。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-05-10 05:46:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lrxczy

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 小周 at 2016-05-10 05:46:28
你查查你的蛋白是不是糖蛋白，糖基化程度多高？原核里没有翻译后修饰。

谢谢！我分析过后应该怎样验证呢？是不是糖蛋白，是不是二聚体，应该用什么样的实验方法验证？

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
9楼2016-05-11 06:54:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lrxczy 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 08:51 by SjQobnC04j06
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 4/200 2026-09-16 06:27 by LH5NkK5Ud4bh
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:15 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 04:27 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-16 04:23 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:50 by DgNGHc3h5tPl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 03:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 7/350 2026-09-16 03:26 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +7 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-16 02:23 by DgNGHc3h5tPl
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 17:59 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:23 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-15 14:58 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-15 14:34 by VMDqgnlKimtZ
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 14:25 by VMDqgnlKimtZ
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:26 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭