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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物做酶切
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jackyoung

新虫 (正式写手)
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8楼: Originally posted by 数到三咱就撤 at 2016-05-11 17:37:26
左边图片是PCR产物7.5微升加水7.5微升混匀，加0.5微升 Apa I，1微升 buffer酶切。四个样一组，共16个不同的样品。酶切时间从左到右依次1H，1.5H，2H，2.5H。右边图片是别人做的，就按照右图进行分型。我想问一下， ...

关于判断，有可能有因为产物量多切不完的情况，也有可能因为产物量少200+条带看不清，但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰，可以作为判断标准。分没有500+带型，700+稍亮于500+带型，和500+强于700+带型三种。

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CestLaVie
11楼2016-05-12 09:12:32
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-12 09:12:32
关于判断，有可能有因为产物量多切不完的情况，也有可能因为产物量少200+条带看不清，但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰，可以作为判断标准。分没有500+带型，700+稍亮于500+带型，和500+强于700+带型三种。
...

这个是四个样品做四组。PCR体系30微升，结束后加水30微升，混匀，取13微升，加酶0.5微升、buffer 1.5微升。每组的1和2有酶切，3和4没有酶切。第一组酶切1小时，二组1.5小时，三组2小时，四组2.5小时。根据酶切时间的增长，而700＋的条带亮度基本上并未减弱，是否就可以判断1小时的时候就已经酶切完全？而且1和2的基因型是GT？？我这次的实验不足的地方还望大神指正。
PCR产物做酶切



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12楼2016-05-12 22:06:34
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
11楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-12 09:12:32
关于判断，有可能有因为产物量多切不完的情况，也有可能因为产物量少200+条带看不清，但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰，可以作为判断标准。分没有500+带型，700+稍亮于500+带型，和500+强于700+带型三种。
...

2000的MK，我也不知道为什么最下边的条带最亮。

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13楼2016-05-12 22:08:20
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jackyoung

新虫 (正式写手)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 数到三咱就撤 at 2016-05-12 22:06:34
这个是四个样品做四组。PCR体系30微升，结束后加水30微升，混匀，取13微升，加酶0.5微升、buffer 1.5微升。每组的1和2有酶切，3和4没有酶切。第一组酶切1小时，二组1.5小时，三组2小时，四组2.5小时。根据酶切时间 ...

胶图很漂亮，时间点设置也很清楚，同一批样品比较有说服力，根据结果而言我倾向于1h，时间再长条带越模糊，0.5h虽然本批次的样品消化完全，但为了保险起见充分消化一下。
看胶图结果，由于700+始终在，前两个样品只能判断为杂合型。但是500+亮于700+的情况与二倍体中推测的情况不符，原因待确认。
建议你确认下这个位点是否在基因组上是多拷贝？或者植物是多倍体或嵌合体的情况。后续可以用更多个体重复一下上述实验，只需要设置1h和2h两个时间点就好，主要看群体中的分布情况，如果有可能根据相对亮度进行区分即可。

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CestLaVie
14楼2016-05-13 08:42:32
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