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jackyoung

新虫 (正式写手)

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8楼: Originally posted by 数到三咱就撤 at 2016-05-11 17:37:26
左边图片是PCR产物7.5微升加水7.5微升混匀,加0.5微升 Apa I,1微升 buffer酶切。四个样一组,共16个不同的样品。酶切时间从左到右依次1H,1.5H,2H,2.5H。右边图片是别人做的,就按照右图进行分型。我想问一下, ...

关于判断,有可能有因为产物量多切不完的情况,也有可能因为产物量少200+条带看不清,但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰,可以作为判断标准。分没有500+带型,700+稍亮于500+带型,和500+强于700+带型三种。

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CestLaVie
11楼2016-05-12 09:12:32
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)

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11楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-12 09:12:32
关于判断,有可能有因为产物量多切不完的情况,也有可能因为产物量少200+条带看不清,但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰,可以作为判断标准。分没有500+带型,700+稍亮于500+带型,和500+强于700+带型三种。
...

这个是四个样品做四组。PCR体系30微升,结束后加水30微升,混匀,取13微升,加酶0.5微升、buffer 1.5微升。每组的1和2有酶切,3和4没有酶切。第一组酶切1小时,二组1.5小时,三组2小时,四组2.5小时。根据酶切时间的增长,而700+的条带亮度基本上并未减弱,是否就可以判断1小时的时候就已经酶切完全?而且1和2的基因型是GT??我这次的实验不足的地方还望大神指正。
PCR产物做酶切



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12楼2016-05-12 22:06:34
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数到三咱就撤

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
11楼: Originally posted by jackyoung at 2016-05-12 09:12:32
关于判断,有可能有因为产物量多切不完的情况,也有可能因为产物量少200+条带看不清,但是从你现有条件来看700+和500+还算清晰,可以作为判断标准。分没有500+带型,700+稍亮于500+带型,和500+强于700+带型三种。
...

2000的MK,我也不知道为什么最下边的条带最亮。

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13楼2016-05-12 22:08:20
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jackyoung

新虫 (正式写手)

引用回帖:
12楼: Originally posted by 数到三咱就撤 at 2016-05-12 22:06:34
这个是四个样品做四组。PCR体系30微升,结束后加水30微升,混匀,取13微升,加酶0.5微升、buffer 1.5微升。每组的1和2有酶切,3和4没有酶切。第一组酶切1小时,二组1.5小时,三组2小时,四组2.5小时。根据酶切时间 ...

胶图很漂亮,时间点设置也很清楚,同一批样品比较有说服力,根据结果而言我倾向于1h,时间再长条带越模糊,0.5h虽然本批次的样品消化完全,但为了保险起见充分消化一下。
看胶图结果,由于700+始终在,前两个样品只能判断为杂合型。但是500+亮于700+的情况与二倍体中推测的情况不符,原因待确认。
建议你确认下这个位点是否在基因组上是多拷贝?或者植物是多倍体或嵌合体的情况。后续可以用更多个体重复一下上述实验,只需要设置1h和2h两个时间点就好,主要看群体中的分布情况,如果有可能根据相对亮度进行区分即可。

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CestLaVie
14楼2016-05-13 08:42:32
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