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fannis金虫 (正式写手)
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[求助]
用细胞试验western blot寻找活性组分 方法可行吗？ 已有1人参与
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小弟有疑问跪求虫友们支招： 最近在分离蛋白质和多肽的功能活性，一句话就是将蛋白酶解后，得到一系列多肽，从中分离出目的活性最好的肽段。但是以前绝大多数筛选多肽的标准都是根据某个固定的化学指标（至少我看到的），由于化学方法稳定性高，因此非常容易一步步分离得到目的肽段；而我的实验的筛选标准是细胞实验，细胞是个活体，通过观察目的蛋白表达量（western blot）来判断其活性的大小，事实上很难得到如化学试验那般稳定的结果，随着不断的筛选发现活性好的肽段：一是同时有好几段活性相似，不容易比较出究竟哪一段最好；二是随着分离的进行，得到的活性肽段实际的活性也并没有如预期所预料的越来越高，而是一直和初始的活性相当。 这下可把我急坏了，别到时候越分离活性还没有最开始的好啊。  请问采用细胞试验这样的筛选方法对吗？有没有大神有过类似的方法呀？求给小弟支个招。 |
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