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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

[求助] 关于斑马鱼的成份测定已有1人参与

小虫目前在做斑马鱼的体成份分析,非常想向大家请教一下,斑马鱼的成鱼体重差不多只有0.7g左右的样子,肝脏也就只有0.003g,那么我怎么才能测定其肝脏中粗脂肪和HUFA组成成份?AOAC等方法,基本上都要求样品量很大(5g),那我岂不是要杀上千尾鱼?!!!
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雨雪寒天

银虫 (小有名气)

您是打算用什么方法测呢?GC or HPLC-MS? 用不着那么多吧,我们平时测脂,做肝脏就用10-50mg左右的样本,鱼的肝脏相对来说脂质含量应该不算太低。斑马鱼视网膜都做过,估计比肝更小

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梦不是用来做的,而是用来实现的!
7楼2016-05-13 22:19:21
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zinfly

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【答案】应助回帖

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weiyuanzheng: 金币+5, 有帮助 2016-05-11 11:35:24
给你推荐个文献http://www.sciencedirect.com/sci ... i/S0044848608001075
里面用的不多,5g一般是常见是食品,整体这么多,

题外话:既然这么小的东西,单测肝脏有意义么?
另外你这个数据,肝脏仅仅占0.4%,感觉不对吧。
2楼2016-05-10 10:45:17
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-05-10 10:45:17
给你推荐个文献http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0044848608001075
里面用的不多,5g一般是常见是食品,整体这么多,

题外话:既然这么小的东西,单测肝脏有意义么?
另外你这个数据,肝脏仅 ...

谢谢您的提醒,数据给成雄鱼性腺了,肝脏差不多是体重0.8g的鱼,肝脏0.026g的样子,也就是超过3%的样子。如您所问,我主要是想做饲料对鱼生长和鱼体组成的影响,可以测全鱼(whole body)、肌肉(muscle)的粗蛋白、粗脂肪,HUFA也可以分析;但是肝脏作为鱼类重要的脂类代谢器官,如果能测定其中的HUFA组成和含量,对研究饲料营养很有指导意义。所以急切盼望专家指导一下肝脏粗脂肪的测定和游离脂肪酸的抽提以便能用于GC分析,谢谢啦,急盼您的回复
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3楼2016-05-11 11:42:10
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-05-10 10:45:17
给你推荐个文献http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0044848608001075
里面用的不多,5g一般是常见是食品,整体这么多,

题外话:既然这么小的东西,单测肝脏有意义么?
另外你这个数据,肝脏仅 ...

您好,首先谢谢您推荐的文章。这篇文献之前一直有些疑问,还望您解答:Fatty acid determination was carried out on experimental diets and tissues. Livers, muscles and ovaries were sampled from 20 fish randomly picked from the replicate tanks per experimental diet at the end of the feeding trial. Total lipid was extracted from samples by homogenization in chloroform/methanol (2:1, v/v) (Bligh and Dyer, 1959), methylated and transesterified with boron trifluoride in methanol (AOAC, 1997).他们用了20尾雌鱼,雌鱼的肝脏加起来差不多也就是0.68g,但是这篇文献参考的试验方法,鳕鱼肌肉选了100g!估计最低限也就是10g,感觉相差很多呀,这样的话,我不得杀上千条鱼?!!
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4楼2016-05-11 11:55:34
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2016-05-11 11:55:34
您好,首先谢谢您推荐的文章。这篇文献之前一直有些疑问,还望您解答:Fatty acid determination was carried out on experimental diets and tissues. Livers, muscles and ovaries were sampled from 20 fish ra ...

也就是这个马来西亚做斑马鱼的,提取斑马鱼肝脏的脂肪酸,方法参考了(Bligh and Dyer, 1959),但是这篇文献里面用的鳕鱼肉至少100g
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5楼2016-05-11 12:00:08
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by weiyuanzheng at 2016-05-11 11:42:10
谢谢您的提醒,数据给成雄鱼性腺了,肝脏差不多是体重0.8g的鱼,肝脏0.026g的样子,也就是超过3%的样子。如您所问,我主要是想做饲料对鱼生长和鱼体组成的影响,可以测全鱼(whole body)、肌肉(muscle)的粗蛋白 ...

标准提供的是一个方法,更重要的步骤,所用的试剂等。
而不是每一步的限量。你完全可以说,参照**那篇文献或者哪个标准,但是做了修改,具体方法如下。
那些标准是更加准确一些,但是量少一点,也是可以接受的。
6楼2016-05-11 13:12:24
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weiyuanzheng

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7楼: Originally posted by 雨雪寒天 at 2016-05-13 22:19:21
您是打算用什么方法测呢?GC or HPLC-MS? 用不着那么多吧,我们平时测脂,做肝脏就用10-50mg左右的样本,鱼的肝脏相对来说脂质含量应该不算太低。斑马鱼视网膜都做过,估计比肝更小

嗯嗯,谢谢提醒,主要是我们这边没有HPLC-MS,送样到检测中心,那边好狠要10g!!!样品预处理没法做,上样肯定没问题,对啦粗脂肪有什么好的测定方法吗?样品量减少到0.5g?
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8楼2016-05-17 11:19:10
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weiyuanzheng

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7楼: Originally posted by 雨雪寒天 at 2016-05-13 22:19:21
您是打算用什么方法测呢?GC or HPLC-MS? 用不着那么多吧,我们平时测脂,做肝脏就用10-50mg左右的样本,鱼的肝脏相对来说脂质含量应该不算太低。斑马鱼视网膜都做过,估计比肝更小

还有粗蛋白你们是怎么测定的,BCA法可以吗,这样的话20mg就ok,但是我看了好多文献,基本上没人用BCA的,到时考马斯量蓝法一大把,但是考马斯亮蓝法误差很大哦,没有BCA法稳定的。
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9楼2016-05-17 11:22:01
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weiyuanzheng

铜虫 (小有名气)

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6楼: Originally posted by zinfly at 2016-05-11 13:12:24
标准提供的是一个方法,更重要的步骤,所用的试剂等。
而不是每一步的限量。你完全可以说,参照**那篇文献或者哪个标准,但是做了修改,具体方法如下。
那些标准是更加准确一些,但是量少一点,也是可以接受的。...

如果是要求2g,你用1.5g也ok,但是减少到50mg,这方法本身误差就很大,系统误差是没避免的,方法本身就已经有问题了。
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10楼2016-05-17 11:23:25
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