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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 转膜的问题
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cathy9452

金虫 (小有名气)

[求助] 转膜的问题 已有2人参与

请问110KD蛋白用150mA左右电流跑多长时间才能转膜成功？@hc-material
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1楼 2016-05-08 15:32:14
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ahbbgzrq

木虫 (小有名气)
我们转膜是恒流转膜，电压一百左右，转膜120min, 240KDa可以转成功。PvDF膜。

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2楼2016-05-08 16:40:08
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cathy9452

金虫 (小有名气)
两小时试过大分子转不过去，70kD以下刚转过去

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3楼2016-05-08 16:42:49
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tim052701

新虫 (正式写手)
建议提高电流到260左右

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4楼2016-05-09 07:39:15
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cathy9452

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tim052701 at 2016-05-09 07:39:15
建议提高电流到260左右

260跑多久？

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5楼2016-05-09 11:47:07
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tim052701

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cathy9452 at 2016-05-09 11:47:07
260跑多久？
...

2小时

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6楼2016-05-09 12:51:55
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wochong

新虫 (小有名气)
只要在SDS-PAGE胶可见范围之内，也就是10kd-120KD之内，都可以进行Western blot检测，转膜条件100V60-70min左右，转不转的上，一是通过wb检测，看看有没有结果，而是染一下胶，看看在不在上面
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7楼2016-05-09 17:58:39
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amwodifl

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

提高电压，延长时间，另外用高灵敏度的显色液。如Thermo Fisher的高灵敏显色液，曝光时间适当延长，会得到结果。如果怀疑没有转膜成功，染胶看看目的蛋白是不是大量存在胶上。
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8楼2016-05-11 15:50:27
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水色12345621

新虫 (小有名气)
300mA 2hr,转的很好

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9楼2016-05-12 08:46:14
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huangwensh

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

我们，半干转，15v45分钟，转的很好
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10楼2016-05-12 14:19:31
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