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yuan720222

新虫 (初入文坛)

[求助] 质粒双酶切。 已有5人参与

提取的质粒,经过双酶切,目的片段是2781bp,载体的片段是2686bp经双酶切后,发现只有一条带,目的片段和载体都处于一个位置,怎么才能跑开两条带?紧急紧急
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yuan720222

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-05-07 19:05:14
你可以把你用的两个酶更换一下,可以分析构建好的质粒图谱,选两个酶切后片段差异较大的酶,只要可以验证克隆就好

可不可以直接对回收产物进行双酶切,双酶切后产物在进行回收,在回收的过程中,蛋白会不会损失很多?
9楼2016-05-08 07:39:22
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liuyuxue

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不行再做一次酶切,找个在载体片段上有酶切位点的
花落人亡两不知
2楼2016-05-07 10:12:01
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kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
明显用3酶切,把载体上有的单一位点一起切了,载体被切切碎不就行了么
3楼2016-05-07 10:37:32
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yuan720222

新虫 (初入文坛)

你好,是对载体上的每一个酶切位点(除目的片段所包含的)都进行单酶切吗
4楼2016-05-07 18:40:48
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