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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒总是筛不到阳性克隆，是否是引物的问题？
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liuwukang

新虫 (小有名气)

[交流] 重组质粒总是筛不到阳性克隆，是否是引物的问题？ 已有5人参与

我用酶切后的质粒做过对照，长出的菌落极少，也就是说质粒还是酶切比较彻底的，与目的片段了解后转化的平板菌落比较多，抗性平板也测试过抗生素没什么问题，现在比较怀疑是不是用的引物不合适，我直接用之前片段克隆的引物鉴定的，而这个引物之前用就觉得扩增效率不是很高，会不会是引物导致的PCR根本没成功所以没有阳性克隆？

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1楼 2016-05-05 23:13:44
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
没切开的几率很大，我最近也是这样

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2楼2016-05-05 23:52:40
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果有能用的通用引物，那就用吧 骚年
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Let God do with it as He wills
3楼2016-05-06 00:39:10
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-06 00:39:10
如果有能用的通用引物，那就用吧 骚年

手头上没有但我有可以用的通用引物序列，今天再试试吧不行就订上通用引物

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4楼2016-05-06 09:42:01
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小威斯

铁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我感觉验证引物可能有问题，我还曾经有过聚合酶过期的问题

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5楼2016-05-06 19:06:02
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liuwukang

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小威斯 at 2016-05-06 19:06:02
我感觉验证引物可能有问题，我还曾经有过聚合酶过期的问题

今天实验成功了，原因暂时不管啦，哈哈

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6楼2016-05-06 20:11:44
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逍遥之乐缘

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
亲，可以试试酶切坚定，菌落PCR并不是唯一的鉴定方法！

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7楼2016-05-08 23:20:08
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llsllslls92

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
酶切鉴定好一点 PCR鉴定不大可靠

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8楼2016-05-09 23:45:21
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