应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 质粒酶切回收
141/2返回列表12下一页
查看: 2229  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Mandy 王曼曼

新虫 (初入文坛)

[交流] 质粒酶切回收 已有6人参与

PLKO.1质粒9000bp，双酶切出7000bp和2000bp的片段，跑电泳（1%琼脂糖）条带正确且清晰，回收质粒用的TIANGEN的，回收后测浓度和吸光值，D260/D280只有1.5甚至更低，操作很小心，好几次都这样，找不到原因，求帮助分析下。谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-05-05 21:20:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
天根胶回收产物直接吸光法测浓度，有的时候会有很大误差，回收产物中残留多糖影响吸光法定量，不如跑个电泳看下。
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-05 23:08:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张凡云

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
是你本来酶切的量不够吗？你切了多大体系，回收最后多少洗脱的

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-06 09:02:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mandy 王曼曼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-05 23:08:32
天根胶回收产物直接吸光法测浓度，有的时候会有很大误差，回收产物中残留多糖影响吸光法定量，不如跑个电泳看下。

您是说，回收的那部分再跑个电泳吗？
赞一下 回复此楼
4楼2016-05-06 10:00:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mandy 王曼曼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张凡云 at 2016-05-06 09:02:18
是你本来酶切的量不够吗？你切了多大体系，回收最后多少洗脱的

量是够的，50ul的体系，4ug的质粒，50ul  洗脱的。浓度也还好，11ng/ul，就是吸光值有问题。D260都没峰。
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-06 10:05:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by Mandy 王曼曼 at 2016-05-06 10:00:59
您是说，回收的那部分再跑个电泳吗？...

对，一般上样2ul就可以。
赞一下 回复此楼
6楼2016-05-06 12:57:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mandy 王曼曼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-05-05 23:08:32
天根胶回收产物直接吸光法测浓度，有的时候会有很大误差，回收产物中残留多糖影响吸光法定量，不如跑个电泳看下。

回收的7000bp又跑电泳，结果如图所示：左边是样，右边是marker（最上面为7000bp）。7000bp处有条带，但是有拖尾，这意味着被降解了吗？
质粒酶切回收
~27H%ONRBMQ1YMZ2OW32[7O.png
赞一下 回复此楼
7楼2016-05-06 13:05:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stone2239

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
7楼: Originally posted by Mandy 王曼曼 at 2016-05-06 13:05:03
回收的7000bp又跑电泳，结果如图所示：左边是样，右边是marker（最上面为7000bp）。7000bp处有条带，但是有拖尾，这意味着被降解了吗？

~27H%ONRBMQ1YMZ2OW32[7O.png
...

可以继续往下做，没有问题。
赞一下 回复此楼
8楼2016-05-06 13:13:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wchuangqi

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
感觉问题不大，可以在回收的时候增加一步wash,看看260/280会不会好点
赞一下 回复此楼
天道酬勤
9楼2016-05-07 00:23:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cvbst

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
胶回收产物用电泳鉴定就行了，以后别用紫外检测了。

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-05-07 09:20:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Mandy 王曼曼 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 070300，一志愿北航320求调剂 +3 Jerry0216 2026-03-22 5/250 2026-03-23 09:16 by 。。堂堂
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 305分求调剂（食品工程） +4 Sxy112 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:26 by 无懈可击111
[考研] 能源材料化学课题组招收硕士研究生8-10名 +5 脱颖而出 2026-03-16 17/850 2026-03-22 15:18 by 脱颖而出
[考研] 生物学一志愿985，分数349求调剂 +4 zxts12 2026-03-21 7/350 2026-03-22 09:57 by zxts12
[考研] 265求调剂 +12 梁梁校校 2026-03-19 14/700 2026-03-21 13:38 by lature00
[考研] 265求调剂 +3 Jack?k?y 2026-03-17 3/150 2026-03-21 03:17 by JourneyLucky
[考研] 085700资源与环境308求调剂 +12 墨墨漠 2026-03-18 13/650 2026-03-21 01:42 by JourneyLucky
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 294求调剂材料与化工专硕 +15 陌の森林 2026-03-18 15/750 2026-03-20 23:28 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南京理工大学085701资源与环境302分求调剂 +4 葵梓卫队 2026-03-18 6/300 2026-03-20 23:02 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 求调剂一志愿南京航空航天大学289分 +3 @taotao 2026-03-19 3/150 2026-03-20 21:34 by JourneyLucky
[考研] A区线材料学调剂 +5 周周无极 2026-03-20 5/250 2026-03-20 21:33 by laoshidan
[考研] 295材料求调剂，一志愿武汉理工085601专硕 +5 Charlieyq 2026-03-19 5/250 2026-03-20 20:35 by JourneyLucky
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭