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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请问关于实时荧光定量pcr实验中重复次数的问题
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xujingyuanxu

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by gnot_nail at 2016-05-06 08:43:00
一般可以三个生物学重复，每次4个重复孔，技术重复就看你操作了，如果结果很好的话，就不需要技术重复吧。至于标取？应该是指引物的梯度吧？理论上是要的，但实际中很多人往往没有做…… 只要结果是好的就默认引物可 ...

额，标曲不是稀释模版的浓度么？

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我努力，我坚持，我成功！
11楼2016-05-06 13:42:19
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gnot_nail

金虫 (正式写手)
引用回帖:
11楼: Originally posted by xujingyuanxu at 2016-05-06 13:42:19
额，标曲不是稀释模版的浓度么？
...

啊 对 稀释模版 不好意思 一时弄错哈哈

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12楼2016-05-06 14:53:42
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wangyou136

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 18:14:21
一般做处理，检测基因表达变化的体系，生物学重复并不等于实验重复，我们自己的标准是一次实验重复内包含两个生物学重复，即处理同样的东西两份，也有两个相应的对照。qRT-PCR的技术重复只是检测加样以及实验系统的 ...

请问你说看三个数据的分散大小，是通过标准准偏差来看的吗？如果是的话，那标准偏差值在什么范围内算是比较好的结果。
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13楼2016-05-10 10:45:04
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
引用回帖:
13楼: Originally posted by wangyou136 at 2016-05-10 10:45:04
请问你说看三个数据的分散大小，是通过标准准偏差来看的吗？如果是的话，那标准偏差值在什么范围内算是比较好的结果。...

不是看标准偏差值在什么幅度内是合适的。
而是标准偏差的大小是否在统计学上产生差异显著性。
如果假定，你某基因表达丰度在Ck组对比treatment组三次实验重复的结果是（1:1.5 ,1:2, 1:5），我的结论是，你的处理会使该基因表达上调（因为趋势一致），但是说实话，统计学分析做下来，你基本会因为误差太大而不具有显著差异性（因为1:5很显然是离群的）。
所以说，以你想要什么样的结果来决定用什么样的表述方式来讲（我这样讲相当危险，因为人本身即具有相当的主观倾向性）
但是，科研很严谨的事，没有一篇文章通篇用定量就能搞定一切。如果有，那录这篇文章的杂志绝对很垃圾。
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Let God do with it as He wills
14楼2016-05-10 22:55:26
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狂狼222


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15楼2016-05-11 10:39:51
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shanyoufeng

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 13:15:32
.................嗯
对于qRT-PCR来说，每次一个反应必须有三个技术重复，这是绝对不能少的。
一般做处理，需要有生物学重复，我们一般是两个
至于实验重复，一般要求三次，看情况来做

不管你怎么做，Mean+/- ...

大神，你好。你说的“Mean+/-SEM”中的SEM是指标准误，是吗？我看一般是写SE呢，这个SEM中的M是指什么？谢谢！
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16楼2016-05-20 17:10:10
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shanyoufeng

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-05 18:14:21
一般做处理，检测基因表达变化的体系，生物学重复并不等于实验重复，我们自己的标准是一次实验重复内包含两个生物学重复，即处理同样的东西两份，也有两个相应的对照。qRT-PCR的技术重复只是检测加样以及实验系统的 ...

哦，SEM是指Standard Error of Mean。明白了~
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17楼2016-05-20 17:33:37
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