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bio~QIN

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落pcr

请问对pet-28b的菌落进行菌落pcr，需要什么条件以及体系！谢谢！
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1楼 2016-05-03 19:17:53
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
bio~QIN: 金币+5, 感谢 2016-06-11 16:57:13
本帖内容被屏蔽
2楼2016-05-04 10:07:35
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hua_geduo

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
如果验证连接后是不是连接上了，可以用pet-28b上的通用引物进行扩增，20微升体系足够了：mix，10微升；水，8微升，上下游引物各1微升，挑取菌落作为模板。
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3楼2016-05-04 10:50:57
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
通用引物55度，根据你片段的长度设计延伸时间

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4楼2016-05-05 23:44:14
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匿名
本帖仅楼主可见
5楼2016-05-05 23:54:44
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sunlugogo

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 娟恋幸福 at 2016-05-05 23:44:14
通用引物55度，根据你片段的长度设计延伸时间

能用自己的引物吗？我的引物上有酶切位点，我的抗性平板上只长出来两个菌落，但是用原来引物扩不出来，是不是被切掉了一部分扩不出来了？还是说，我那是没切开的质粒被转进去了……

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6楼2016-05-08 12:32:24
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以用特异性引物，应该是没连接上的质粒

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7楼2016-05-09 00:07:24
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