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bio~QIN

新虫 (初入文坛)

[交流] 菌落pcr

请问对pet-28b的菌落进行菌落pcr,需要什么条件以及体系!谢谢!
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
bio~QIN: 金币+5, 感谢 2016-06-11 16:57:13
本帖内容被屏蔽

2楼2016-05-04 10:07:35
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hua_geduo

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
如果验证连接后是不是连接上了,可以用pet-28b上的通用引物进行扩增,20微升体系足够了:mix,10微升;水,8微升,上下游引物各1微升,挑取菌落作为模板。
3楼2016-05-04 10:50:57
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
通用引物55度,根据你片段的长度设计延伸时间

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4楼2016-05-05 23:44:14
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5楼2016-05-05 23:54:44
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sunlugogo

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 娟恋幸福 at 2016-05-05 23:44:14
通用引物55度,根据你片段的长度设计延伸时间

能用自己的引物吗?我的引物上有酶切位点,我的抗性平板上只长出来两个菌落,但是用原来引物扩不出来,是不是被切掉了一部分扩不出来了?还是说,我那是没切开的质粒被转进去了……

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-05-08 12:32:24
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娟恋幸福

新虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
可以用特异性引物,应该是没连接上的质粒

发自小木虫Android客户端
7楼2016-05-09 00:07:24
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