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令狐少陈

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因克隆的问题

各位大神,我的问题描述如下:
首先我克隆的基因命名为080,通过转录组预测的ORF是:1.JPG
然后我设计引物如图中黄色和蓝色,进行基因克隆,得到的序列是:2.JPG
比较两个图可以看到,引物是有的,绿色部分是不一样的序列,而其他地方完全一致。
我对这部分绿色在NCBI上BLAST,发现也比对到了我所研究的转录因子家族。
然后我对克隆得到的序列寻找ORF,就得到了3.JPG的结果,好几个短短的ORF。
我现在进行的是在转录组序列的绿色部分设计正向引物,和之前的反向引物配对,看能不能扩出片段,在做后续打算。
其实这个克隆已经很久了,我重复了三遍,结果完全一致,真是蛋疼啊。
所以大神给我解释解释吧,在给我教教接下来怎么操作的建议,小弟在这里谢谢你们了。。。。

基因克隆的问题
1.JPG


基因克隆的问题-1
2.JPG


基因克隆的问题-2
3.JPG
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