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克隆实验 质粒与目的基因连接不成功 电泳出现多条条带
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质粒是 Pet28a 条带大小 5300bp 双酶切： HindIII 和 BamHI 分步双酶切 （酶是Thermos 公司，按照说明书酶切） 目的基因 条带 1000bp 分步双酶切 现用 Thermos 公司的T4 ligase 连接，按照说明书，22度，10min，20ul 体系， DNA／质粒＝ 3:1 电泳结果很奇怪，师姐做了一半走了，我也是分子小白，所以请教大家，谢谢！ [img][/img] 图片由右到左，第一个是Marker（15000bp），第二个（control vector before）是只加入质粒（无T4连接酶），第三个（only vector）加入质粒和T4连接酶，第四（T1 before）个加入质粒＋基因（未加入T4连接酶），第五个（T1）加入质粒＋基因＋T4连接酶，第六个和第七个与第四个和第五个一样，GLP是目的基因，Pet是载体。  T4连接 0426.jpg |
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