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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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iamrohy

银虫 (初入文坛)

[交流] 使用CTAB提取植物总DNA的问题(求助结束)

使用CTAB法提水稻和大豆的DNA
过程大致:(以大豆为例)
1、约1g叶片进行研磨
2、加入3ml 的1×CTAB & 100ul 的 β-巯基乙醇后,65℃水浴40min,平均10min混匀一次
3、之后,再加入等体积的氯仿异戊醇(24:1)混匀,在室温下,12000rpm离心10min,取上清液。
4、再加入等体积氯仿异戊醇溶液10000rpm离心10min,取上清液。
5、加入两倍体积的无水乙醇,置于4℃冰箱静置。

问题:在第5步中加入无水乙醇之后发现,溶液中存在大量的乳白色的杂质沉淀,这是什么原因?如何解决?

谢谢!~

非常感谢大家,问题已经解决了,发现是CTAB有问题,重新配过之后就好了
[search]dna提取  大量沉淀[/search]

[ Last edited by iamrohy on 2008-10-30 at 21:06 ]
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多俗呀,不写了
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xiaotian2005

木虫 (职业作家)


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
正常,无水乙醇就是用来沉淀DNA的!
心态决定一切
2楼2008-10-27 15:03:20
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iamrohy

银虫 (初入文坛)

关键是加入无水乙醇后还没有放入4度冰箱静置,在光底下就发现悬浮的乳白色的杂质沉淀
多俗呀,不写了
3楼2008-10-27 15:09:02
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mofashishe

铜虫 (小有名气)


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
好正常的,有时直接在第5部把DNA挑出来再用酒精洗的。。。。。
4楼2008-10-27 16:17:11
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天涯海角

木虫 (著名写手)

害群之牛


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
很正常,没必要往四度冰箱放置,白色絮状的东东,就是dna,用75%的酒精洗两次,再用ddh20溶解了就可以用了!
井底之蛙也可笑看天下
5楼2008-10-27 17:45:32
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
乳白色的杂质沉淀,就是DNA,但有可能是DNA被打断了,片段比较小。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
6楼2008-10-27 18:37:05
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欣晴5832

金虫 (小有名气)


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
这很正常,沉淀DNA之后也可以离心一下,然后再用75%乙醇洗两次就可以了。
7楼2008-10-27 23:27:06
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十比

木虫 (著名写手)

再正常不过了.
8楼2008-10-27 23:34:09
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mever

木虫 (正式写手)

★ ★
iamrohy(金币+2,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
应该有两种可能:
1 蛋白质没有除净,建议使用酚氯仿异戊醇25:24:1抽提一到两次,再用氯仿异戊醇抽提一次。鉴别标准是抽提的液相界面清亮无白色物质
2.你的CTAB提取液中盐离子成分过高,在加入乙醇后很容易析出,掺杂在DNA中,解决办法是离心沉淀后再用70%乙醇洗涤白色的DNA沉淀,多洗几次将盐离子洗涤出来。
9楼2008-10-28 08:33:18
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jbhu220

铁杆木虫 (职业作家)


iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢,问题解决了,原来是CTAB的问题
DNA是棉絮状的,没有颜色的。沉淀的很可能是蛋白质,说明你纯化有问题,可加25:234:1先抽提一次,再用24:1抽提一次,注意不要吸取离心沉淀的蛋白质
10楼2008-10-28 09:39:13
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