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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 使用CTAB提取植物总DNA的问题（求助结束）
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iamrohy

银虫 (初入文坛)

[交流] 使用CTAB提取植物总DNA的问题（求助结束）

使用CTAB法提水稻和大豆的DNA
过程大致：（以大豆为例）
1、约1g叶片进行研磨
2、加入3ml 的1×CTAB & 100ul 的 β-巯基乙醇后，65℃水浴40min，平均10min混匀一次
3、之后，再加入等体积的氯仿异戊醇（24：1）混匀，在室温下，12000rpm离心10min，取上清液。
4、再加入等体积氯仿异戊醇溶液10000rpm离心10min，取上清液。
5、加入两倍体积的无水乙醇，置于4℃冰箱静置。

问题：在第5步中加入无水乙醇之后发现，溶液中存在大量的乳白色的杂质沉淀，这是什么原因？如何解决？

谢谢！～

非常感谢大家，问题已经解决了，发现是CTAB有问题，重新配过之后就好了
[search]dna提取  大量沉淀[/search]

[ Last edited by iamrohy on 2008-10-30 at 21:06 ]
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多俗呀，不写了
1楼 2008-10-27 13:41:01
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xiaotian2005

木虫 (职业作家)
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
正常，无水乙醇就是用来沉淀DNA的！
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心态决定一切
2楼2008-10-27 15:03:20
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iamrohy

银虫 (初入文坛)
关键是加入无水乙醇后还没有放入4度冰箱静置，在光底下就发现悬浮的乳白色的杂质沉淀
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多俗呀，不写了
3楼2008-10-27 15:09:02
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mofashishe

铜虫 (小有名气)
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
好正常的，有时直接在第5部把DNA挑出来再用酒精洗的。。。。。
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4楼2008-10-27 16:17:11
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天涯海角

木虫 (著名写手)

害群之牛
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
很正常，没必要往四度冰箱放置，白色絮状的东东，就是dna，用75%的酒精洗两次，再用ddh20溶解了就可以用了！
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井底之蛙也可笑看天下
5楼2008-10-27 17:45:32
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
乳白色的杂质沉淀，就是DNA，但有可能是DNA被打断了，片段比较小。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
6楼2008-10-27 18:37:05
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欣晴5832

金虫 (小有名气)
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
这很正常，沉淀DNA之后也可以离心一下，然后再用75%乙醇洗两次就可以了。
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7楼2008-10-27 23:27:06
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十比

木虫 (著名写手)
再正常不过了.
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8楼2008-10-27 23:34:09
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mever

木虫 (正式写手)
★ ★
iamrohy(金币+2,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
应该有两种可能：
1 蛋白质没有除净，建议使用酚氯仿异戊醇25：24：1抽提一到两次，再用氯仿异戊醇抽提一次。鉴别标准是抽提的液相界面清亮无白色物质
2.你的CTAB提取液中盐离子成分过高，在加入乙醇后很容易析出，掺杂在DNA中，解决办法是离心沉淀后再用70%乙醇洗涤白色的DNA沉淀，多洗几次将盐离子洗涤出来。
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9楼2008-10-28 08:33:18
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jbhu220

铁杆木虫 (职业作家)
★
iamrohy(金币+1,VIP+0):谢谢，问题解决了，原来是CTAB的问题
DNA是棉絮状的，没有颜色的。沉淀的很可能是蛋白质，说明你纯化有问题，可加25：234：1先抽提一次，再用24：1抽提一次，注意不要吸取离心沉淀的蛋白质
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10楼2008-10-28 09:39:13
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