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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 双酶切和质粒PCR验证结果不一样
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家喻户晓

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
这个可能性很小，如果是携带全基因组的话电泳条带会非常大的

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11楼2016-04-25 09:16:41
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popo0625

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
很简单，说明重组了，重新挑克隆，不行换宿主菌
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认真活每一天
12楼2016-04-25 09:48:44
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弑者星魂

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你做pcr的时候有没有做质粒空对照，要是假阳性，应该能排除

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13楼2016-04-25 10:33:55
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小冀-

版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是假阳性，如果菌落pcr有条带，酶切不对，一般情况下都是没连上
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···
14楼2016-04-26 15:19:35
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zlh1225

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小冀- at 2016-04-26 15:19:35
可能是假阳性，如果菌落pcr有条带，酶切不对，一般情况下都是没连上

谢谢

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化学
15楼2016-04-27 06:50:08
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zlh1225

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 小冀- at 2016-04-26 15:19:35
可能是假阳性，如果菌落pcr有条带，酶切不对，一般情况下都是没连上

谢谢，重新做了

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化学
16楼2016-04-27 06:50:25
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段李晓彤

银虫 (正式写手)

院士虫
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
挑几个单克隆菌落？

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17楼2016-04-27 07:46:19
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
18楼2016-04-27 10:44:37
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苦逼岁月

新虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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9楼: Originally posted by 家喻户晓 at 2016-04-25 08:21:48
你用空载和你的质粒一块跑个胶，看看大小，不行的话就分别把空载和质粒单酶切，然后跑个电泳看一下条带大小

大家好，我是新手对于构建质粒！
第一个问题是如何看质粒上的MCS（多克隆位点），是质粒图谱上标准的所有酶切位点上都是MCS，还是只是粗黑色箭头表示的区域是MCS？
第二个问题就是我实际中的碰到的问题，本实验室只有pET-32a这个表达载体，然而我老师想用pET-SUMO这个质粒，所以我们就自己构建；我们首先问别人要到了SUMO基因的模版，然后分别用带有酶切位点的引物把SUMO基因扩出来酶切（Ndel+Bamh1）;然后用Ndel+Bamh1酶切质粒pET-32a;然后连接转化，现在总是做不出来，问题就是这样做有问题么？嗯，我也问了群里的一些人，他们说你这样做应该做不出来，他们说我用Ndel这个酶切位点第一不再MCS上，第二他有两个酶切位置，你这样酶切会把质粒切碎，破坏质粒的完整性，肯定扩不出来！所以我想请问大家一下！！！！
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19楼2016-08-16 09:34:45
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