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zhongliruoqi

新虫 (小有名气)

[求助] 请教小鼠脑片的冰冻切片的相关问题 已有1人参与

大家好,请问有没有大侠做过脑片的冰冻切片的?最近需要做相关的免疫实验,脑片380um,纯纯的新手。。。而且实验室没有做相关实验的。。各种查阅资料经验以及请教其他实验室做过组织冰冻切片的同学后,自己在尝试4%多聚甲醛固定过24h、4h的脑片在OCT包埋(剪去尖部的1.5mL EP管作为容器)和液氮速冻时还是感觉问题重重,主要有以下几点,希望可以与各位有相关经验的同志们交流学习,谢谢大家!
1.如果后续做免疫荧光的话,脑片切多少um效果更好?8um可以吗?
2.OCT包埋时,脑片距离包埋完毕时的OCT表面多少距离比较好(因为涉及到冰冻切片时的修块问题)
3.脑片在OCT中很难保持水平,总会出现倾斜,如何解决呢?
4.OCT包埋时总会有些大小不等的气泡,会影响之后的液氮速冻吗?因为发现液氮速冻后,包埋剂的表面不平整,总有些突起状
5.如果在液氮速冻时,钓入液氮罐的放有包埋好的样品的EP管接触到了漏入自制小盒的液氮液体,出现“沸腾状”,会对包埋的样品有影响吗?
      希望路过的朋友们可以给出一些意见或建议,交流学习,谢谢大家!
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star013

新虫 (知名作家)


3楼2016-04-24 11:23:41
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百灵鸟h

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我做漂片30um,脑子倾斜是因为你没有修平底部,用刀片垂直修平
2楼2016-04-23 23:53:33
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zhongliruoqi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 百灵鸟h at 2016-04-23 23:53:33
我做漂片30um,脑子倾斜是因为你没有修平底部,用刀片垂直修平

我需要用固定过的380um的脑片直接进行冰冻切片,脑片之前已经是切出来的,怎么会不平?此处的“倾斜”主要指脑片厚度太薄,所以不好把握水平度。
请教一下,何为“漂片”?多谢!
4楼2016-04-25 21:16:58
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zhongliruoqi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by star013 at 2016-04-24 11:23:41
我们可以做冰冻切片

具体?
5楼2016-04-25 21:17:18
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