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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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wrsdaw

新虫 (初入文坛)

[求助] 同一个基因PCR结果显示对照组有单一的目标条带,两个处理组都有两个条带 已有1人参与

求助各位大神:
   我想对几个基因在处理后的表达进行荧光定量,RNA经反转录获得cDNA后进行了PCR,其中有一个基因的PCR结果显示在对照组里有单一的目标条带(约200bp),而处理组除了目标条带还出现了一条更长的条带(约500bp),请问会是什么原因造成的呢?针对该基因的两对引物都出现了同样的情况,此外还知道该基因在处理中被上调了。谢谢各位大神,多多给宝贵的意见。
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有可能是可变剪接,有的可变剪接是受诱导的。建议把PCR产物两条带都测序看一下。
4楼2016-04-23 13:07:27
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langzian

木虫 (正式写手)

亲,提问要说详细点,你的处理是怎么处理的,敲除还是插入,或者别的,插入就很容易理解,敲除这种情况也是有可能出现的,但是两个组都出现这种情况就不多了,建议你把片段送去测序看看

发自小木虫Android客户端
江山
2楼2016-04-22 23:37:36
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wrsdaw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by langzian at 2016-04-22 23:37:36
亲,提问要说详细点,你的处理是怎么处理的,敲除还是插入,或者别的,插入就很容易理解,敲除这种情况也是有可能出现的,但是两个组都出现这种情况就不多了,建议你把片段送去测序看看
...

大神,不好意思我现在补充一下,我的处理不是敲除和插入,是药物处理植物后提取RNA,通过转录组测序发现该基因上调了,所以针对该基因设计了两对引物进行验证实验,反转录后PCR结果在对照组里得到了目的基因条带,可是两个药物处理组都处理除了目标条带还有一条bp更大的条带,用同样的转录后的cDNA,其他几个基因都没有问题
3楼2016-04-23 00:11:18
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wrsdaw

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-23 13:07:27
有可能是可变剪接,有的可变剪接是受诱导的。建议把PCR产物两条带都测序看一下。

谢谢,如果是可变剪切的话,怎么来设计引物做荧光定量呢,是否测序后再来设计呢,谢谢
5楼2016-04-23 15:38:09
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