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魄木

金虫 (小有名气)

[求助] qPCR 验证转座子插入后是Knock down 还是 Knock out

现拿到一批转座子插入的植物(二倍体)突变体, 经过基因型鉴定,找出了纯合的插入突变体,但是需要验证插入该基因后是Knock down 还是 Knock out, 由于没有合适抗体,不能从蛋白水平验证.现需要用qPCR来验证,野生型为对照,你觉得设计引物从哪里设计比较好,还需要注意什么事项

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lqz816

新虫 (初入文坛)

先跨转座子设计引物,看能否扩出,看转录是否能越过转座子,mrna是否异常,还可以再在插入位点前面的mrna设计引物,看正常或异常mrna表达如何,这样即可判断

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2楼2016-04-22 08:44:09
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lqz816

新虫 (初入文坛)

再在插入位点后设计一对得到的信息就完整了

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3楼2016-04-22 08:47:04
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