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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)

[求助] 求助pcr 已有3人参与

pcr做了好几次都这样,不知道哪里出问题了~求大神赐教,体系如图。

求助pcr


求助pcr-1


@gyesang 发自小木虫Android客户端
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chenweijlu

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

体系说明书就有不会有什么问题,就3个问题,你的引物问题,退火温度问题,RNA质量不好降解没反转好,前俩个问题先跑个梯度,现在要是好的引物,一般就是55度跑,不带变的,后一个测下你的RAN质量
13楼2016-04-25 11:40:42
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stone2239

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
不做阴性对照、阳性对照,出了问题很难说具体是哪里的问题,影响PCR的因素有很多。选材是否正确?mRNA质量如何?反转录效率如何?各试剂是否有效?引物是否合适?PCR程序是否合适?……
2楼2016-04-21 12:24:18
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花开ヽ终是落

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by stone2239 at 2016-04-21 12:24:18
不做阴性对照、阳性对照,出了问题很难说具体是哪里的问题,影响PCR的因素有很多。选材是否正确?mRNA质量如何?反转录效率如何?各试剂是否有效?引物是否合适?PCR程序是否合适?……

同学做的都出了

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3楼2016-04-21 16:29:44
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for_margaret

新虫 (小有名气)

primer不是应该一个reverse,一个fronter的吗

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4楼2016-04-22 04:32:05
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