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求助，CDNA做绝对定量的protocol 已有3人参与
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各位大神们，求助下 1我现在有反转出来的cDNA（原始的rna样也有）然后想做绝对定量，具体该怎么操作啊，看了很多帖子，一直没明白做标准曲线之前的步骤要怎么搞 2这个cdna里边不是有好多基因吗 比如我想用gapdh做标准曲线 ，要先干嘛 pcr扩增？然后转到质粒里边？还是直接割胶回收?然后再梯度稀释吗？这个具体怎么操作 或者需要什么试剂盒 3是不是梯度稀释完了 上机（罗氏480），测出来Ct值之后就可以做标曲啦 然后我跑实验组和对照组 ，找对应的浓度，就可以比较表达量的多少了？ 4 假如上边说的是对的，我有30多个基因要看 ?，是不是要做30个标曲 一个基因一个， 5不做相对定量是因为做的是温度的实验，β-actin gapdh?tubulin ? ?都是变化的? 有没有哪位老师同学 解惑一下下 谢谢 发自小木虫Android客户端 |
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