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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 求助大神！关于Sephadex G25凝胶层析柱的问题！
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miao911204

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神！关于Sephadex G25凝胶层析柱的问题！ 已有2人参与

清蛋白，碱性蛋白酶酶解得到活性肽。酶解物经过膜包过滤，检测活性之后选择小组分的继续分离纯化。
Sephadex G25凝胶层析柱，摸索了很多次，快2个月了吧，已知得到的图是像阶梯状的，最后一个峰是峰高较高，峰宽比较小的，前面两个虽然有吸光度，但是都是平线，没有起来。
我以为可能是分子量太小都集中了，就尝试了一下G15.最后也之后一个峰。基本状况和G25相似。前面两个包，像M型的，之后吸光度稍稍下降之后，重新起来，形成了最后一个峰。
我真是蒙了！我酶解物，和超滤的组分，都是有活性的啊……
现在这种情况怎么办啊！
求大神帮忙！
我是新人，第一次求助，表述不明白的，请各位包涵


这实验也太坎坷了，宝宝心里苦啊！

求助大神！关于Sephadex G25凝胶层析柱的问题！
G25最初.jpg
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1楼 2016-04-19 14:39:48
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个用的是紫外检测器么？
波长选的多少？我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议，做一个全扫描，看看前面两个的定量波长是多少，然后再选择合适的波长。
或者是先接出来，换一个方式测定含量。
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2楼2016-04-19 17:49:58
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miao911204

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-04-19 17:49:58
你这个用的是紫外检测器么？
波长选的多少？我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议，做一个全扫描，看看前面两个的定量波长是多少，然后再选择合适的波长。
或者是先接出来，换一个方式测定含量。

是紫外检测仪，波长选择的是280nm

全扫描是用什么方法啊？我不知道我有没有这样的条件。
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3楼2016-04-22 16:07:10
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miao911204

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-04-19 17:49:58
你这个用的是紫外检测器么？
波长选的多少？我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议，做一个全扫描，看看前面两个的定量波长是多少，然后再选择合适的波长。
或者是先接出来，换一个方式测定含量。

第一次用这个，还没有搞明白。

就是我不知道全扫描都是需要做啥？
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4楼2016-04-22 16:08:40
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110147加油

金虫 (小有名气)
我最近总的和你的一样，结果也一样，不过我是小肽，也只有一个峰，我也想知道为什么？

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5楼2016-04-26 12:56:06
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110147加油

金虫 (小有名气)
你也是很早就出来了吗？峰

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6楼2016-04-26 12:59:49
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心碎de玻璃杯

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by miao911204 at 2016-04-22 16:08:40
第一次用这个，还没有搞明白。

就是我不知道全扫描都是需要做啥？...

把各个峰分段收集一下，然后用紫外光度计扫一下，确定最佳吸收波长，再看看。本来凝胶层析的分辨率就不高，不可以考虑用别的纯化方法么，比如说离子交换，反相层析之类的。
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大曹(Daisogel)硅胶填料15862310050
7楼2016-09-08 11:26:20
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