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miao911204

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助大神!关于Sephadex G25凝胶层析柱的问题! 已有2人参与

清蛋白,碱性蛋白酶酶解得到活性肽。酶解物经过膜包过滤,检测活性之后选择小组分的继续分离纯化。
Sephadex G25凝胶层析柱,摸索了很多次,快2个月了吧,已知得到的图是像阶梯状的,最后一个峰是峰高较高,峰宽比较小的,前面两个虽然有吸光度,但是都是平线,没有起来。
我以为可能是分子量太小都集中了,就尝试了一下G15.最后也之后一个峰。基本状况和G25相似。前面两个包,像M型的,之后吸光度稍稍下降之后,重新起来,形成了最后一个峰。
我真是蒙了!我酶解物,和超滤的组分,都是有活性的啊……
现在这种情况怎么办啊!
求大神帮忙!
我是新人,第一次求助,表述不明白的,请各位包涵


这实验也太坎坷了,宝宝心里苦啊!

求助大神!关于Sephadex G25凝胶层析柱的问题!
G25最初.jpg
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zinfly

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你这个用的是紫外检测器么?
波长选的多少?我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议,做一个全扫描,看看前面两个的定量波长是多少,然后再选择合适的波长。
或者是先接出来,换一个方式测定含量。
2楼2016-04-19 17:49:58
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miao911204

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-04-19 17:49:58
你这个用的是紫外检测器么?
波长选的多少?我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议,做一个全扫描,看看前面两个的定量波长是多少,然后再选择合适的波长。
或者是先接出来,换一个方式测定含量。

是紫外检测仪,波长选择的是280nm

全扫描是用什么方法啊?我不知道我有没有这样的条件。
3楼2016-04-22 16:07:10
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miao911204

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zinfly at 2016-04-19 17:49:58
你这个用的是紫外检测器么?
波长选的多少?我猜测可能是波长问题。
如果有条件建议,做一个全扫描,看看前面两个的定量波长是多少,然后再选择合适的波长。
或者是先接出来,换一个方式测定含量。

第一次用这个,还没有搞明白。

就是我不知道全扫描都是需要做啥?
4楼2016-04-22 16:08:40
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110147加油

金虫 (小有名气)

我最近总的和你的一样,结果也一样,不过我是小肽,也只有一个峰,我也想知道为什么?

发自小木虫IOS客户端
5楼2016-04-26 12:56:06
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110147加油

金虫 (小有名气)

你也是很早就出来了吗?峰

发自小木虫IOS客户端
6楼2016-04-26 12:59:49
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心碎de玻璃杯

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by miao911204 at 2016-04-22 16:08:40
第一次用这个,还没有搞明白。

就是我不知道全扫描都是需要做啥?...

把各个峰分段收集一下,然后用紫外光度计扫一下,确定最佳吸收波长,再看看。本来凝胶层析的分辨率就不高,不可以考虑用别的纯化方法么,比如说离子交换,反相层析之类的。
大曹(Daisogel)硅胶填料15862310050
7楼2016-09-08 11:26:20
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