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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 质粒解冻后的扩增问题
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O天琊O

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒解冻后的扩增问题 已有1人参与

请教一个问题，我将质粒解冻后进行PCR扩增，发现了一个现象，就是质粒解冻后存放的时间越长，扩增的Ct就越小，亦即扩增的效率越高。请问这种现象合理么？这批解冻的质粒一直放在4度的，每次用之前都会震荡一下，用了大约一周。我感觉似乎是因为震荡导致质粒片段化了，从而使得扩增效率增高，不知道有人有这方面的经验没
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没有什么不可以
1楼 2016-04-19 12:48:11
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tbsjxy

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做定量PCR的话的确与模板浓度有很大关系，模板浓度太高的话，曲线会出现问题。有可能是这种情况，因为质粒的话一般提出来浓度都很高。
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该用户由于违规已被禁言一辈子
2楼2016-04-19 13:46:28
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O天琊O

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tbsjxy at 2016-04-19 13:46:28
做定量PCR的话的确与模板浓度有很大关系，模板浓度太高的话，曲线会出现问题。有可能是这种情况，因为质粒的话一般提出来浓度都很高。

我是用了三个浓度梯度，每一个浓度都这个样子，最低浓度是大约1OE4coies/uL，浓度不是很高的呀
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没有什么不可以
3楼2016-04-19 17:46:55
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O天琊O

银虫 (小有名气)
有人解答么
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没有什么不可以
4楼2016-04-20 12:32:45
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