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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 材料区 » 生物材料 » 综合其他 » 【请教】羧基化量子点与带氨基的生物分子连接的问题
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nioutou

木虫 (正式写手)

[交流] 【请教】羧基化量子点与带氨基的生物分子连接的问题

我买了些表面-COOH的量子点,想与氨基修饰的一段引物连接.用的是EDC/NHS偶连方法,最后的实验结果表明连接不成功.我不是搞这行的,那位大侠帮忙分析一下可能是什么原因,以下是主要的步骤(参考的bioconjucate techniques):
1.量子点5mg/ml取1毫升(pH 5.5 MES),加入EDC和NHS(终浓度2mM,5mM),室温20分钟
2.离心，弃清，用pH7.4 PBS洗涤并分散在pH7.4PBS中，加入5'氨基的引物，室温反应2-3小时
3.离心，洗涤，用tris封闭1小时，离心，洗涤

至今找不到问题出在那里，虫虫们多帮忙了

[ Last edited by zhangwj on 2008-10-28 at 23:12 ]
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生活的优雅与否，不取决于你所持的茶具、所付的茶资。它取决于你品茗的态度。
1楼 2008-10-25 15:45:13
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zhangwj

荣誉版主 (职业作家)

小木虫无限续航核潜艇
请参看此帖：http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=943590
如有必要请跟此贴讨论 ，谢谢！
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谢谢支持材料区@小木虫论坛
2楼2008-10-25 16:48:57
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zbbqds

银虫 (正式写手)
程序没有错啊
你怎么知道没有连接上？
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3楼2008-10-26 15:06:31
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nioutou

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zbbqds at 2008-10-26 15:06:
程序没有错啊
你怎么知道没有连接上？

设计的一些检测实验没有信号。
标记完引物后离心清夜中引物的量用260nm吸收测定和加入量差别不大
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生活的优雅与否，不取决于你所持的茶具、所付的茶资。它取决于你品茗的态度。
4楼2008-10-26 21:52:32
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wgcui

铁杆木虫 (著名写手)
多做几遍。还有，就是这个反应的接枝率不高。我做过，测出来效率才很低。
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5楼2008-10-28 09:29:48
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xjyang

金虫 (小有名气)
你看的那的bioconjucate techniques ?
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6楼2008-11-14 16:01:54
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0115402

铁杆木虫 (正式写手)
★
yusen_1982(金币+1,VIP+0):谢谢应助,欢迎常来生物材料版
EDC比较活泼，尤其与氨基反应，反应温度太高会容易水解，此反应应该在冰浴中进行比较好。
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7楼2008-12-21 21:30:30
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ywliustc

金虫 (小有名气)
★
wgcui(金币+1,VIP+0):welcome to the biomaterials 2-27 09:14
“EDC比较活泼，尤其与氨基反应，反应温度太高会容易水解，此反应应该在冰浴中进行比较好。”

room temperature is OK, I think the temperature the lz use is no problem
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8楼2009-02-27 03:20:51
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milk5852

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2009-04-04 23:39:01
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lliumei912

wgcui(金币+0,VIP+0):能将文献发上来么？ 4-7 09:58
引用回帖:
Originally posted by 0115402 at 2008-12-21 21:30:
EDC比较活泼，尤其与氨基反应，反应温度太高会容易水解，此反应应该在冰浴中进行比较好。

EDC活化的羧基，可以与羟基连接吗？
看到一篇2003年的文献在金电极表面羧基化后用EDC来连接没有修饰的DNA，通过羧基和羟基的连接
赞一下(10人) 回复此楼
10楼2009-04-05 10:33:25
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